吳茱萸及其習(xí)用品藥材中7個成分的HPLC含量測定
發(fā)布時間:2019-08-28 來源: 感恩親情 點擊： 
[摘要]建立HPLC同時測定吳茱萸及其習(xí)用品藥材中檸檬苦素、吲哚類生物堿（14N-甲酰二氫吳茱萸次堿、吳茱萸堿和吳茱萸次堿）及喹諾酮類生物堿（1-甲基-2-正十一烷基-4（1H）-喹諾酮、吳茱萸卡品堿和二氫吳茱萸卡品堿）含量的方法。采用YMC C18 （4.6 mm ×250 mm，5 μm） 色譜柱；流動相為乙腈（A）-四氫呋喃（B）-5 mmol·L-1醋酸銨緩沖液（pH 3.8）（C），梯度洗脫；流速1.0 mL·min-1；柱溫30 ℃；檢測波長220，250 nm。7個成分的分離度良好，標(biāo)準(zhǔn)曲線在檢測范圍內(nèi)均呈良好線性，r=0.999 9。加樣回收率平均值為96.69%～102.4%，RSD為1.4%～3.1%。該方法簡便、準(zhǔn)確，重復(fù)性好。對5種18批吳茱萸類藥材進行含量測定，結(jié)果顯示7個被測成分在5種藥材中均有分布，但含量差異很大。16批正品吳茱萸中7個成分的總質(zhì)量分?jǐn)?shù)在9.46～69.9 mg·g-1，平均為28.2 mg·g-1。密果吳萸中7個成分的總含量為25.8 mg·g-1，在正品含量范圍內(nèi)，略低于平均值；臭辣吳萸中7個成分的總質(zhì)量分?jǐn)?shù)為7.69 mg·g-1，低于正品的含量下限。密果吳萸和臭辣吳萸與正品吳茱萸相比，主要成分一致，含量總體低于正品吳茱萸。
[關(guān)鍵詞]吳茱萸；檸檬苦素；生物堿；含量測定；高效液相色譜法
吳茱萸為傳統(tǒng)中藥，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為中品。其性味辛、苦，熱，有小毒；具散寒止痛，降逆止嘔，助陽止瀉的功效。主要用于治療厥陰頭痛，寒疝腹痛，寒濕腳氣等[1]。1977～2010年版《中國藥典》均收載吳茱萸為蕓香科植物吳茱萸Evodia rutaecarpa（Juss.） Benth.，石虎E. rutaecarpa（Juss.） Benth. var. officinalis （Dode） Huang或疏毛吳茱萸E. rutaecarpa（Juss.） Benth. var. bodinieri （Dode） Huang的干燥近成熟果實。這3種吳茱萸在中國秦嶺以南各地均有分布，是商品藥材中的主流品種。同屬的密果吳萸E.compacta Hand.-Mazz.和臭辣吳萸E. fargesii Dode也是民間重要藥材。密果吳萸為土家族民間常備藥，對治療胃痛、頭痛、心腹氣痛有良效[2]。湖北民間有用臭辣吳萸的果實做吳茱萸代用品，也有認為本種的果與吳茱萸具有相同藥效[3]。吳茱萸的基源多樣性及分布廣泛性造成了各地吳茱萸的質(zhì)量差異。關(guān)于密果吳萸和臭辣吳萸的主要成分與正品吳茱萸相比是否一致，未見相關(guān)報道。
吳茱萸的質(zhì)量評價研究報道很多，但所選指標(biāo)基本集中于吳茱萸堿、吳茱萸次堿和檸檬苦素[4-5]。2010年版《中國藥典》將這3個成分作為藥材質(zhì)量評價的指標(biāo)成分。吳茱萸主要含生物堿類（吲哚類和喹諾酮類）、檸檬苦素類、黃酮類、揮發(fā)油類等化學(xué)成分[6]。Zhao Meng-yao等測定了12批吳茱萸中去氫吳茱萸堿等6個吲哚類生物堿的含量[7]。除吳茱萸堿等吲哚類生物堿外，喹諾酮類生物堿同樣是吳茱萸中含量較高的一類有效成分，存在于提取物的脂溶性部位。文獻報道吳茱萸中喹諾酮類生物堿具有抗幽門螺桿菌[8]，抑制白三烯生物合成[9]，抑制血管緊張素Ⅱ受體結(jié)合等作用[10]，與吳茱萸的傳統(tǒng)功效具有相關(guān)性。因此，喹諾酮類生物堿也應(yīng)是吳茱萸的藥效成分之一，而該類成分因?qū)φ掌啡狈Χ缓雎裕浜繙y定研究僅零星報道，如Wu Chang-chuang等測定了33批市售吳茱萸樣品中11個喹諾酮類生物堿的含量[11]。為了全面評價吳茱萸及其主要習(xí)用品的質(zhì)量，本文以《中國藥典》收錄的吳茱萸3種正品、臭辣吳萸、密果吳萸5種18批樣品為研究對象，以檸檬苦素，吲哚類生物堿（14N-甲酰二氫吳茱萸次堿、吳茱萸堿、吳茱萸次堿），喹諾酮類生物堿（1-甲基-2-正十一烷基-4（1H）-喹諾酮、吳茱萸卡品堿、二氫吳茱萸卡品堿）7個主要成分的含量為評價指標(biāo)，對目前我國吳茱萸主產(chǎn)地藥材和2批習(xí)用品藥材進行系統(tǒng)比較，以探討其品質(zhì)差異，為進一步完善吳茱萸的國家標(biāo)準(zhǔn)提供基礎(chǔ)性研究證據(jù)。
1材料
島津LC-20AT高效液相色譜系統(tǒng)，包括四元梯度洗脫泵、自動進樣器、柱溫箱和二極管陣列檢測器（日本島津公司），KQ-250DBX型數(shù)控超聲波清洗儀（ 昆山市超聲儀器有限公司），XS105型1/10萬電子天平（ 瑞士梅特勒-托利多有限公司）。FW100高速萬能粉碎機（天津泰斯特儀器有限公司）。
檸檬苦素（批號110800-200404，純度大于95%） 對照品購自中國食品藥品檢定研究院，供含量測定用。14N-甲酰二氫吳茱萸次堿、吳茱萸堿、吳茱萸次堿、1-甲基-2-十一烷基-4（1H）-喹諾酮、吳茱萸卡品堿和二氫吳茱萸卡品堿對照品為作者自制，并經(jīng)MS，NMR鑒定結(jié)構(gòu)，HPLC檢測，面積歸一化法計算純度均大于98%。甲醇、乙腈、四氫呋喃為色譜純（美國Fisher公司），水為娃哈哈純凈水，其他試劑均為分析純。
實驗用藥材共18批見表1。密果吳萸由湖南中醫(yī)藥大學(xué)林麗美副教授采集于衡山并鑒定。其余樣品由作者實地采集或購買，實地采集的樣品均由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所林余霖研究員鑒定，購買的4批商品藥材由作者根據(jù)性狀、產(chǎn)地、化學(xué)成分等信息進行鑒定。標(biāo)本保存于中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究中心。
2方法與結(jié)果
2.1色譜條件 YMC C18色譜柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm）；流動相為乙腈（A）-四氫呋喃（B）- 5 mmol·L-1醋酸銨緩沖液（pH 3.8）（C）；梯度洗脫（0～10 min，21%～23%A，10%B；10～30 min，23%～24%A，10%B；30～45 min，24%～26%A，10%B；45～50 min，26%A，10%B；50～53 min，26%～60%A，10%B；53～68 min，60%A，10%B；68～70 min，60%～80%A，10%B；70～80 min，80%A，10%B）；流速1.0 mL·min-1；柱溫30 ℃； 檢測波長220，250 nm。在上述色譜條件下，樣品中檸檬苦素、14N-甲酰二氫吳茱萸次堿、吳茱萸堿、吳茱萸次堿、1-甲基-2-十一烷基-4（1H）-喹諾酮、吳茱萸卡品堿和二氫吳茱萸卡品堿色譜峰的保留時間與對照品一致，7個成分的色譜峰能達到較好的分離，且純度檢查符合要求，樣品其他成分對欲測成分的測定無干擾。吳茱萸樣品（貴州余慶）色譜圖見圖1。密果吳萸及臭辣吳萸的色譜圖見圖2。
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