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        不同產(chǎn)地黃芪藥材中毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量的比較

        發(fā)布時(shí)間:2019-08-29 來源: 感恩親情 點(diǎn)擊:

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          摘要:通過高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定不同產(chǎn)地黃芪藥材中毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量,以期為黃芪藥材質(zhì)量評(píng)定提供依據(jù)。采用Waters Symmetry C18 色譜柱(250 mm×4.6 mm,5 μm ),流動(dòng)相為乙腈-水(81 ∶19),流速:1.0 mL/min,柱溫:30 ℃,進(jìn)樣量10 μL,檢測(cè)波長(zhǎng)260 nm。結(jié)果表明:毛蕊異黃酮葡萄糖苷的濃度在0.145 6~0.698 7 mg/mL 范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系,r=0.999 7,平均加樣回收率為100.35%,RSD為1.98%,所建方法快速、簡(jiǎn)便、重現(xiàn)性好。4個(gè)省份16個(gè)產(chǎn)地藥材中毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量差異較大,其中內(nèi)蒙古自治區(qū)包頭市所產(chǎn)黃芪中其含量最高。從各地平均值看,內(nèi)蒙古自治區(qū)>山西省>甘肅省>黑龍江省,且內(nèi)蒙古自治區(qū)與其他3個(gè)省份藥材中毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量差異顯著。省內(nèi)之間的差異顯著性結(jié)果表明,內(nèi)蒙自治區(qū)和山西省產(chǎn)地之間差異較大,甘肅省和黑龍江省產(chǎn)地之間差異較小。
          關(guān)鍵詞:黃芪;毛蕊異黃酮葡萄糖苷;HPLC
          中圖分類號(hào): S567.01
          文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A
          文章編號(hào):1002-1302(2016)04-0226-03
          黃芪為著名滋補(bǔ)中藥,是豆科植物蒙古黃芪[Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge. var. mongholicus (Bge.) Hsiao]或膜莢黃芪[Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge.]的干燥根,F(xiàn)代藥理研究表明:黃芪具有斂瘡生肌、延緩衰老、增強(qiáng)機(jī)體免疫等功能[1]。諸多研究證明,黃酮類作為黃芪中的主要成分之一,其抗炎、抗病毒、調(diào)節(jié)免疫等多方面的藥理作用非常顯著[2-6]。毛蕊異黃酮葡萄糖苷作為黃芪藥材中黃酮類的主要成分,已被2010版《中國(guó)藥典》作為黃芪藥材的指標(biāo)性成分[1]。
          黃芪分布于華北、東北及西北地區(qū)。目前市場(chǎng)上的黃芪藥材產(chǎn)地較廣,品質(zhì)差異較大[7-8]。本研究通過對(duì)黃芪4個(gè)主產(chǎn)省份山西省、內(nèi)蒙自治區(qū)、黑龍江省、甘肅省16個(gè)不同產(chǎn)地藥材中的毛蕊異黃酮葡萄糖苷進(jìn)行測(cè)定,并運(yùn)用SSR法比較不同產(chǎn)地黃芪藥材中毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量的差異大小,研究結(jié)果可為黃芪藥材的品質(zhì)評(píng)價(jià)提供基礎(chǔ)和依據(jù)。
          1 儀器、材料和試劑
          1.1 儀器
          Waters 2695高效液相色譜儀、2998 PDA檢測(cè)器、RE-52AA 系列旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、KQ3200DE型數(shù)控超聲波清洗器、SHZ-DIII循環(huán)水式多用真空泵、FZ102微型植物試樣粉碎機(jī)、FA1004電子天平、DK-S24電熱恒溫水浴鍋、GF-101型電熱鼓風(fēng)干燥箱。
          1.2 材料
          黃芪藥材分別購(gòu)于山西省、內(nèi)蒙自治區(qū)、黑龍江省、甘肅省等當(dāng)?shù)厮幉氖袌?chǎng),共4個(gè)省16個(gè)不同產(chǎn)地的黃芪,經(jīng)運(yùn)城學(xué)院滕紅梅教授認(rèn)定均為黃芪藥材。將藥材置于40 ℃電熱鼓風(fēng)干燥箱進(jìn)行干燥,研成粉末過60目篩保存以備用。
          1.3 試劑
          毛蕊異黃酮葡萄糖苷對(duì)照品(購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào):20141109);水為二次重蒸水,甲醇和乙腈為色譜純。
          2 方法與結(jié)果
          2.1 黃芪中毛蕊異黃酮葡萄糖苷測(cè)定方法的建立
          2.1.1 色譜條件 Waters公司Symmetry C18 色譜柱 (250 mm×4.6 mm,5 μm);流動(dòng)相水-乙腈(81 ∶19);柱溫,30 ℃;流速,1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng),260 nm;進(jìn)樣量10 μL。色譜圖見圖1。
          2.1.2 對(duì)照品溶液的制備 精確稱取毛蕊異黃酮葡萄糖苷對(duì)照品6.950 mg置10 mL容量瓶中。加甲醇溶解、搖勻,即得。
          2.1.3 供試品溶液的制備 將精確稱取的2 g黃芪粉末置于具塞錐形瓶中,加入甲醇50 mL,于80 ℃水浴鍋中加熱回流4 h,待放涼后再搖勻過濾,濾渣用10 mL甲醇洗滌2~3次,之后將原液與洗滌液合并,減壓回收溶劑后將殘?jiān)蛹状既芙,再轉(zhuǎn)移至5 mL容量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻后用微孔濾膜過濾,即得到供試品溶液。
          2.1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 吸取毛蕊異黃酮苷對(duì)照品溶液 1 000 μL,加入濾過的甲醇2 000 μL,再用微孔濾膜濾過,置于樣品瓶中。按“2.1.1”節(jié)的色譜條件分別進(jìn)樣2、4、6、8、10 μL,以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,結(jié)果發(fā)現(xiàn),在濃度范圍內(nèi),標(biāo)準(zhǔn)品濃度與其峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。線性回歸方程為y=3.80×107 x+1.06×106,r=0.999 7,線性范圍0.145 6~0.698 7 mg/mL。
          2.1.5 精密度試驗(yàn) 精確吸取山西省渾源市同一供試品溶液重復(fù)進(jìn)樣5次,測(cè)得毛蕊異黃酮葡萄糖苷峰面積的RSD為0.46%。
          2.1.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取山西省渾源市同一供試品溶液,分別在0、2、4、8、16、24 h檢測(cè),顯示毛蕊異黃酮葡萄糖苷峰面積的RSD為1.20%。
          2.1.7 重現(xiàn)性試驗(yàn) 準(zhǔn)確稱取產(chǎn)自山西省渾源市的藥材粉末平行樣品5份,按“2.1.3”節(jié)的制備方法操作,顯示毛蕊異黃酮葡萄糖苷峰面積的RSD為1.67%,平均含量為 0.234 mg/g,表明本法重現(xiàn)性良好。
          2.1.8 回收率試驗(yàn) 稱取含量已知的同一批樣品5份,每份約0.5 g,依次加入濃度為0.133 mg/mL的毛蕊異黃酮葡萄糖苷對(duì)照品溶液4 mL。按“2.1.3”節(jié)方法配制樣品溶液,并于“2.1.1”節(jié)色譜條件下進(jìn)樣,根據(jù)測(cè)量結(jié)果計(jì)算出各對(duì)照品的平均加樣回收率。計(jì)算所得回收率為100.35%,RSD為 1.98%。
          2.1.9 樣品含量測(cè)定 精確量取樣品溶液按照“2.1.1”節(jié)的色譜條件測(cè)定其峰面積,根據(jù)“2.1.2”節(jié)得出的回歸方程計(jì)算不同產(chǎn)地黃芪毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量。

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