[摘要] 該研究通過制備大鼠外翻腸囊模型，并對其轉(zhuǎn)運活性進(jìn)行了確認(rèn)，以秦艽中的馬錢苷酸、當(dāng)藥苦苷、龍膽苦苷、以及當(dāng)藥苷為檢測指標(biāo)，用HPLC對經(jīng)腸囊主動轉(zhuǎn)運吸收后被吸收進(jìn)入漿膜層的秦艽提取物中的主要成分群進(jìn)行了分析，探討了中藥材主要吸收成分群的研究方法。結(jié)果表明所采用的大鼠外翻腸囊模型，在實驗45 min內(nèi)，組織結(jié)構(gòu)完整，轉(zhuǎn)運活性良好；HPLC的專屬性和線性關(guān)系良好，精密度的RSD<5.5%；樣品的萃取回收率均在90%以上；在室溫條件下，樣品的穩(wěn)定性良好。秦艽提取物經(jīng)腸囊主動轉(zhuǎn)運后，在漿膜液樣品中，檢測到了8種主要成分；提取物的濃度對主要成分的吸收具有極其顯著影響，而不同腸段對主要成分吸收的影響沒有顯著差異。由此可見，大鼠外翻腸囊技術(shù)可用于某些中藥材的吸收成分群的研究，是一種探討中藥材活性成分的有效方法。
　　[關(guān)鍵詞] 中藥材；秦艽；外翻腸囊；HPLC；吸收成分群
　　[收稿日期] 2013-06-04
　　[基金項目] 國家“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項（2009ZX09308-003，2009ZX09301-005，2009ZX09502-021）；中央級公益性科研究院所基本科研業(yè)務(wù)費專項（22070833）
　　[通信作者] 朱晶晶，E-mail：zhujj15@163.com
　　中醫(yī)藥是我國傳統(tǒng)文化的瑰寶，長期中藥研究實踐表明中藥具有成分眾多、作用機制復(fù)雜的特點。如何從紛雜的成分中甄別主要有效成分，是中藥臨床實踐中不可或缺的一個關(guān)鍵步驟�；�于中藥材可能存在著化學(xué)成分群>>吸收成分群>有效成分群的原則，中藥材經(jīng)胃腸道消化，并通過小腸吸收后的成分群將會直接影響著中藥材的臨床效果，因此，對于經(jīng)口服方式發(fā)揮作用的中藥來說，其消化性是決定該中藥臨床療效的前提和基礎(chǔ)，而對該中藥經(jīng)小腸吸收后的主要成分的定性、定量研究，是值得借鑒的中藥材有效成分研究和評價的方法。本研究采用大鼠外翻腸囊（everted gut sac， EGS）模型[1-2]，并對腸囊的轉(zhuǎn)運活性進(jìn)行了確認(rèn)；以中藥材秦艽為研究對象，以其中的馬錢苷酸、當(dāng)藥苦苷、龍膽苦苷、和當(dāng)藥苷為監(jiān)測指標(biāo)，用HPLC對秦艽提取物經(jīng)空腸和回腸腸段主動轉(zhuǎn)運吸收后，進(jìn)入漿膜層一側(cè)樣品中的主要成分進(jìn)行了分析，指認(rèn)了吸收成分群中的部分主要成分。研究結(jié)果表明，大鼠外翻腸囊模型可以用來作為中藥材吸收成分群研究與評價的有效方法。
　　1 材料
　　Wistar大鼠，雄性，體重（200±20）g，由北京維通利華實驗動物有限公司提供。合格證號SCXK-（京） 2009-0017，上述動物均以標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料飼養(yǎng)。
　　Agilent1260高效液相色譜系統(tǒng)（包括四元泵、柱溫箱、自動進(jìn)樣器、DAD檢測器和Agilent ChemStation 工作站，Agilent公司）；Agilent6320 HPLC-MS質(zhì)譜儀（Agilent公司）；BF-2000氮吹儀，PSAN-8氮氣發(fā)生器（北京中惠普分析技術(shù)研究所）；混合氧氣瓶（95%O₂，5%CO₂）。
　　氯化鉀，氯化鈉，碳酸氫鈉，磷酸二氫鈉，葡萄糖，氯化鎂，氯化鈣（分析純，北京化學(xué)試劑公司），乙腈（色譜純，Dikma公司），甲醇（色譜純，Dikma公司），純凈水（杭州娃哈哈集團有限公司），乙酸（分析純，北京化工廠）。
　　對照品龍膽苦苷（gentiopicroside，110770-201013）、當(dāng)藥苷（sweroside，111742-200501）、馬錢苷酸（loganic acid，110770-201013），由中國食品藥品檢定研究院提供。當(dāng)藥苦苷（swertiamarian），由成都普思生物科技有限公司提供，純度均大于98%。
　　秦艽（QinJiao， Genitana Macrophyllae Radix， GMR）藥材，購自甘肅省天水，經(jīng)上海中醫(yī)藥大學(xué)吳立宏副研究員鑒定為Gentiana crassicaulis Duthie ex Burk.的干燥根，符合《中國藥典》（2010年版）秦艽項下規(guī)定的內(nèi)容。
　　2 方法
　　2.1 樣品制備
　　2.1.1 臺氏液的制備 分別精密稱取NaCl 8.0 g，KCl 0.28 g，NaHCO₃ 1.0 g，NaH₂PO₄ 0.05 g，MgCl₂ 0.1 g，溶于500 mL蒸餾水中，密閉冷藏；精密稱取CaCl₂ 0.2 g，溶于500 mL蒸餾水中，密閉冷藏；臨用前，在不斷攪拌下，將后者與前者均勻混合，加入葡萄糖 1.0 g，調(diào)節(jié)pH 7.4即得。
　　2.1.2 混合對照品溶液的制備 分別精密取各對照品，用甲醇制備成一系列不同濃度的混合對照品溶液，對每個濃度的對照品，分別取200 μL混合溶液，加入200 μL臺氏液；振蕩混勻后，用氮氣吹干，加200 μL甲醇，超聲溶解；移取上清液，用0.22 μm濾膜濾過，備用�；旌蠈φ掌啡芤褐校�各對照品的質(zhì)量濃度分別為馬錢苷酸（8.78，70.14，175.4，350.7，701.4 mg·L^-1）、當(dāng)藥苦苷（2.83，5.66，11.32，22.64，11.32 mg·L^-1）、龍膽苦苷（10.01，50.05，100.1，200.2，2 002 mg·L^-1）、當(dāng)藥苷（2.83，5.66，11.32，22.64，56.6 mg·L^-1）。
　　2.1.3 供試樣品的制備 將經(jīng)氮氣吹干后的供試樣品，用200 μL甲醇，超聲5 min，溶解，移取上清液，用0.22 μm濾膜濾過，備用。
　　2.2 大鼠外翻腸囊模型構(gòu)建

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