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        杜仲藥材薄層色譜鑒別研究

        發(fā)布時(shí)間:2019-08-28 來(lái)源: 幽默笑話 點(diǎn)擊:

        http://img1.qikan.com.cn/qkimages/zgmx/zgmx201401/zgmx20140107-1-l.JPGhttp://img1.qikan.com.cn/qkimages/zgmx/zgmx201401/zgmx20140107-2-l.JPG
          【摘要】目的:以杜仲藥材對(duì)照品、松脂醇二葡萄糖苷和京尼平苷酸為對(duì)照,建立杜仲藥材的薄層色譜鑒別。方法:采用硅膠G高效預(yù)制板,以三氯甲烷-正丁醇-水-乙酸(1∶7∶1∶1)為展開(kāi)劑上行展開(kāi)。結(jié)果:考察不同的提取方法,展開(kāi)劑和展開(kāi)條件,最終確定實(shí)驗(yàn)方法。經(jīng)對(duì)5批藥材進(jìn)行試驗(yàn)均斑點(diǎn)清晰,分離度好。結(jié)論:鑒別方法靈敏度高,專屬性強(qiáng),可用于杜仲藥材的定性鑒別。
          【關(guān)鍵詞】杜仲;松脂醇二葡萄糖苷;京尼平苷酸;薄層鑒別
          【中圖分類號(hào)】R282.5【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517(2014)02-0008-02
          杜仲藥材是被子植物門(mén)杜仲科杜仲屬植物的樹(shù)皮[1],在中國(guó)藥典2010年版中,杜仲藥材的定性鑒別仍為外觀性狀及顯微鑒別,這種鑒別方法對(duì)于完整的杜仲藥材來(lái)說(shuō)是可行的,但對(duì)于粉末狀藥材或藥材提取物等來(lái)說(shuō)就不適應(yīng)。根據(jù)有關(guān)報(bào)道,杜仲的降壓成分主要是松脂醇二葡萄糖苷,屬于木質(zhì)素類化合物,其降壓作用明顯且未見(jiàn)不良反應(yīng),且對(duì)動(dòng)物血壓有雙向調(diào)節(jié)功能,也是現(xiàn)行藥典定量成分。另外,杜仲藥材所含的京尼平苷酸具有一定的防癌、抗癌、抗腫瘤、抗輻射損害、抗氧化、抗衰老及調(diào)節(jié)血壓等作用。本文以杜仲藥材對(duì)照品、松脂醇二葡萄糖苷和京尼平苷酸為對(duì)照,建立了杜仲藥材的薄層鑒別方法,具有斑點(diǎn)清晰,分離度良好,操作簡(jiǎn)便,方法重復(fù)性好的特點(diǎn)。
          1儀器和試藥
          硅膠G高效預(yù)制板,索氏提取器,水浴鍋(DK-98-11A,天津市泰斯特儀器有限公司)。松脂醇二葡萄糖苷(批號(hào)111537-200501)、京尼平甘酸(批號(hào)111828-201102)、杜仲(批號(hào)121202-0301)均購(gòu)自貴州省食品藥品監(jiān)督管理局,藥材樣品經(jīng)貴州省食品藥品檢驗(yàn)所中藥檢測(cè)室鑒定為杜仲藥材。所用試劑均為分析純。
          2方法研究與結(jié)果
          2.1溶液制備方法
          2.1.1供試品溶液采用《中國(guó)藥典》2010年版中對(duì)杜仲中松脂醇二葡萄糖苷含量測(cè)定的提取方法。取杜仲藥材2g,精密稱定,置索氏提取器中,加入三氯甲烷適量,加熱回流6h,棄去三氯甲烷液,藥渣揮去三氯甲烷,再置索氏提取器中,加入甲醇適量,加熱回流6h,提取液過(guò)濾回收甲醇至適量,轉(zhuǎn)移至10ml兩瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,即得。
          2.1.2對(duì)照藥材溶液取杜仲對(duì)照藥材2g,精密稱定,置索氏提取器中,按照供試品溶液的方法制備即得。
          2.1.3對(duì)照品溶液松脂醇二葡萄糖苷溶液的制備:取松脂醇二葡萄糖苷對(duì)照品適量,精密稱定,加甲醇制成每1ml含5mg的溶液。京尼平苷酸溶液的制備:取京尼平苷酸對(duì)照品適量,精密稱定,加甲醇制成每1ml含5mg的溶液。
          2.2薄層條件的優(yōu)化
          2.2.1展開(kāi)劑及展開(kāi)條件的考察和比較通過(guò)系列預(yù)試驗(yàn),確定基本具體操作方法:分別吸取對(duì)照品溶液,對(duì)照藥材溶液和供試品溶液,點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,將展開(kāi)劑倒于展缸中預(yù)飽和30min,薄層板預(yù)飽和20min展開(kāi)后,上行展開(kāi),展距8cm.。取出,晾干,噴以5%香草醛硫酸溶液顯色。
          考察石油醚-乙醚(7:3);石油醚-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(4:3:3:1);石油醚-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(5:4:0.5:0.5)三種展開(kāi)劑,試驗(yàn)結(jié)果表明,只有石油醚-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(5:4:0.5:0.5)可以將杜仲分離,但是分離效果亦不理想。經(jīng)進(jìn)一步對(duì)三氯甲烷-正丁醇-水-乙酸溶液展開(kāi)系統(tǒng)的有關(guān)比例進(jìn)行調(diào)整,分別考察三氯甲烷-正丁醇-水-乙酸溶液(3:5:1:0.5);三氯甲烷-正丁醇-水-乙酸溶液(1:7:1:1);三氯甲烷-正丁醇-水-乙酸溶液(1:8:1:1)。結(jié)果這三種展開(kāi)劑都可以再薄層板上將杜仲藥材成分進(jìn)行分離,但是經(jīng)三氯甲烷-正丁醇-水-乙酸溶液(3:5:1:0.5)展開(kāi)的松脂醇二葡萄糖苷的Rf值太低,經(jīng)三氯甲烷-正丁醇-水-乙酸溶液(1:8:1:1)展開(kāi)的中松脂醇二葡萄糖苷的Rf值太高,只有三氯甲烷-正丁醇-水-乙酸溶液(1:7:1:1)中的松脂醇二葡萄糖苷的Rf值較為恰當(dāng),見(jiàn)表1。
          2.2.2點(diǎn)樣方式和點(diǎn)樣量的比較考察點(diǎn)狀點(diǎn)和條帶狀點(diǎn)兩種方式,結(jié)果顯示,點(diǎn)條帶狀點(diǎn)比較容易出現(xiàn)拖尾且斑點(diǎn)分離不明顯,點(diǎn)狀點(diǎn)斑點(diǎn)比較清晰。在點(diǎn)樣量為3μl時(shí),京尼平甘酸溶液和供試品溶液斑點(diǎn)均清晰,并且供試品斑點(diǎn)分離較好,但是對(duì)照藥材和松脂醇二葡萄糖苷溶液斑點(diǎn)過(guò)淺,在紫外燈下幾乎觀察不到,故把對(duì)照藥材溶液的點(diǎn)樣量增加到4μl,松脂醇二葡萄糖苷溶液的點(diǎn)樣量增加到6μl,結(jié)果分離效果明顯,斑點(diǎn)清晰。故確定京尼平甘酸溶液和供試品溶液點(diǎn)樣量為3μl,對(duì)照藥材溶液的點(diǎn)樣量為4μl,松脂醇二葡萄糖苷溶液的點(diǎn)樣量為6μl。
          2.2.3檢視條件的選擇在日光條件下檢視供試品溶液的展開(kāi)斑點(diǎn),在與京尼平甘酸對(duì)照品對(duì)應(yīng)的位置上可顯相同顏色的斑點(diǎn),但是與松脂醇二葡萄糖苷對(duì)照品對(duì)應(yīng)位置上的斑點(diǎn)太淺,不易辨認(rèn)。在紫外條件下,供試品溶液與京尼平甘酸和松脂醇二葡萄糖苷對(duì)照品對(duì)應(yīng)的位置上均可顯相同顏色的斑點(diǎn),且斑點(diǎn)清晰,容易辨認(rèn)。綜合考慮,選擇紫外光源作為檢視條件。
          2.2.4層析條件的驗(yàn)證薄層板:硅膠G高效預(yù)制板;點(diǎn)樣:點(diǎn)狀點(diǎn)樣,京尼平甘酸溶液和供試品溶液點(diǎn)樣量為3μl,對(duì)照藥材溶液的點(diǎn)樣量為4μl,松脂醇二葡萄糖苷溶液的點(diǎn)樣量為6μl;展開(kāi)劑:三氯甲烷-正丁醇-水-乙酸溶液(1:7:1:1)為展開(kāi)劑。展缸預(yù)飽和30min,上行展開(kāi)8cm,顯色:噴以5%香草醛硫酸溶液顯色,在100℃加熱顯色至斑點(diǎn)清晰。檢視光源:紫外光。結(jié)果如圖1、2。
          3討論
          杜仲的薄層鑒別報(bào)道中[4-6],一般只采用松脂醇二葡萄糖苷作為對(duì)照,本研究設(shè)立了對(duì)照品藥材、松脂醇二葡萄糖苷、京尼平苷酸三個(gè)對(duì)照,從而可提高杜仲藥材定性鑒別的專屬性和可控性。同時(shí),以本研究確定的展開(kāi)系統(tǒng)鑒別杜仲藥材,經(jīng)多批次樣品試驗(yàn)表明方法的重現(xiàn)性良好。對(duì)于樣品溶液的制備,曾探討過(guò)多種方法,但都不能有效的去除杜仲膠等雜質(zhì),最終選擇2010年版《中國(guó)藥典》中對(duì)于松脂醇二葡萄糖苷的提取方法。從薄層板的結(jié)果可知,供試品分離效果良好,在實(shí)際檢測(cè)中,杜仲藥材薄層鑒別的供試品溶液可直接利用其含量測(cè)定的提取溶液進(jìn)行試驗(yàn)。
          參考文獻(xiàn)
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         。ㄊ崭迦掌冢2013.12.07)

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