摘 要 隨著我國(guó)農(nóng)業(yè)技術(shù)的不斷發(fā)展，蔬菜的生長(zhǎng)期得到了縮短。但由于我國(guó)環(huán)境污染的加劇，蔬菜的病蟲(chóng)害越來(lái)越重，導(dǎo)致了農(nóng)藥的廣泛使用，蔬菜需要施放農(nóng)藥后才能夠生長(zhǎng)和成熟。蔬菜的農(nóng)藥殘留問(wèn)題以及食品安全問(wèn)題已成為社會(huì)和群眾普遍關(guān)注的問(wèn)題，加強(qiáng)對(duì)蔬菜農(nóng)藥殘留的檢測(cè)，保證蔬菜食用的安全性是急需解決的問(wèn)題之一�；�于此，探討與分析酶抑制法在蔬菜農(nóng)藥殘留檢測(cè)中的效果。
　　關(guān)鍵詞 酶抑制法；蔬菜；農(nóng)藥殘留；檢測(cè)技術(shù)
　　中圖分類號(hào)：S481+.8 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2018.09.057
　　目前，由于市場(chǎng)上的生產(chǎn)者沒(méi)有嚴(yán)格遵守農(nóng)藥的安全使用準(zhǔn)則，導(dǎo)致了農(nóng)藥的超量使用，甚至使用違禁的農(nóng)藥，增加了中毒事件發(fā)生率[1-2]。為了確保我國(guó)人民群眾的生命安全，必須嚴(yán)格控制農(nóng)藥的使用，加強(qiáng)對(duì)蔬菜農(nóng)藥殘留的檢測(cè)。我國(guó)對(duì)于蔬菜農(nóng)藥殘留主要通過(guò)酶抑制法進(jìn)行檢測(cè)，酶抑制法具有時(shí)間短、效率高的特點(diǎn)，對(duì)于檢測(cè)人員技術(shù)要求水平較低，在我國(guó)蔬菜生產(chǎn)基地、農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)機(jī)構(gòu)中運(yùn)用較為廣泛，能夠保證蔬菜產(chǎn)品的安全性。
　　1 蔬菜農(nóng)藥殘留
　　農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)過(guò)程中施用農(nóng)藥后都會(huì)殘留農(nóng)藥，農(nóng)藥可殘留于蔬菜產(chǎn)品中，也可以殘留于水或土中，此種現(xiàn)象則被成為農(nóng)藥殘留[3]。農(nóng)藥污染較為嚴(yán)重的有小白菜、油菜、韭菜等葉類蔬菜。相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，目前世界上農(nóng)藥的品種已經(jīng)達(dá)到上千種，常見(jiàn)的有殺蟲(chóng)劑、除草劑、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑等，農(nóng)藥殘留嚴(yán)重危害人體的身體健康，嚴(yán)重者可能導(dǎo)致人體大腦、血液等受到損傷。
　　2 蔬菜農(nóng)藥殘留檢測(cè)的必要性
　　近年來(lái)，隨著病蟲(chóng)害發(fā)生頻率的增加，農(nóng)藥的品種和毒性也在隨之增強(qiáng)，農(nóng)藥的使用有效的防治了病蟲(chóng)害，為農(nóng)業(yè)帶來(lái)了巨大的豐收，但同時(shí)也嚴(yán)重破壞了生態(tài)系統(tǒng)的平衡，加重了生態(tài)壞境的惡化程度。殘留的農(nóng)藥會(huì)通過(guò)蔬菜等食品進(jìn)入人體，食用含有農(nóng)藥殘留的蔬菜會(huì)導(dǎo)致人體急性中毒，長(zhǎng)期食用農(nóng)藥殘留超標(biāo)的蔬菜，可能引起慢性中毒，嚴(yán)重者甚至誘發(fā)癌癥[4]。我國(guó)十分重視農(nóng)藥的檢測(cè)，制定了一系列的法律法規(guī)來(lái)控制農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留值，如《農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全法》《農(nóng)藥合理使用準(zhǔn)則》等，降低農(nóng)藥對(duì)蔬菜的污染，切實(shí)保障大眾人群的健康和安全。
　　3 蔬菜農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)
　　蔬菜農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法大致可以分為快速檢測(cè)技術(shù)、色譜法、光譜法、酶抑制法等。1）快速檢測(cè)技術(shù)主要是以氧化還原反應(yīng)為檢測(cè)依據(jù)，產(chǎn)物與檢測(cè)液發(fā)生作用后會(huì)變色，但該方法靈敏度較低，局限性較強(qiáng)，并且受到還原性物質(zhì)的影響，因此應(yīng)用價(jià)值較低。2）色譜法能夠?qū)κ卟酥修r(nóng)藥的殘留進(jìn)行定量分析，靈敏度較高，但該方法儀器投資大、檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，同時(shí)對(duì)技術(shù)的要求較高，不利于在基層中推廣使用。3）光譜法對(duì)樣品處理的要求較低、環(huán)境污染小、分析速度快，但光譜法只能檢測(cè)一種有機(jī)磷農(nóng)藥，因此靈敏度較為缺乏，不能作為主要檢測(cè)方法。酶抑制法具有快速、靈敏、成本低、操作便利等特點(diǎn)，成為蔬菜農(nóng)藥殘留檢查的標(biāo)準(zhǔn)方法之一。
　　4 酶抑制法檢測(cè)蔬菜農(nóng)藥殘留
　　4.1 檢測(cè)原理
　　乙酰膽堿是生物神經(jīng)傳導(dǎo)中重要的一種酶，能夠保證神經(jīng)沖動(dòng)的正常傳導(dǎo)，有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥能夠抑制昆蟲(chóng)的中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)中的乙酰膽堿活動(dòng)，大量積累乙酰膽堿，對(duì)正常神經(jīng)傳導(dǎo)造成影響，從而導(dǎo)致昆蟲(chóng)中毒而死[5]。酶抑制法則是通過(guò)昆蟲(chóng)中毒原理進(jìn)行農(nóng)藥殘留的檢測(cè)，將特異性抑制膽堿酯酶與樣品提取液進(jìn)行反應(yīng)，若特異性抑制膽堿酯酶受到抑制，則說(shuō)明樣品中含有農(nóng)藥殘留。
　　4.2 檢測(cè)范圍
　　1）蔬菜。綠葉菜、白菜、瓜菜、果菜、豆菜、根莖類、茄果類、蔥蒜類等，其中，小白菜、空心菜等極易殘留農(nóng)藥，因此需要著重進(jìn)行監(jiān)測(cè)。
　　2）農(nóng)藥。有機(jī)磷類農(nóng)藥，如甲胺磷、對(duì)硫磷、馬拉硫磷、甲基內(nèi)吸磷、甲基對(duì)硫磷、敵百蟲(chóng)、敵敵畏等；氨基甲酸酯類農(nóng)藥，如涕滅威、呋喃丹、葉蟬散、異索威、西維因等。
　　4.3 檢測(cè)條件
　　室溫保持在25～30 ℃，室內(nèi)濕度不能高于85%[6]。
　　4.4 檢測(cè)方法
　　儀器主要采用農(nóng)藥殘毒快速檢測(cè)儀、電子天平、蒸餾水機(jī)、玻璃儀器、電熱恒溫培養(yǎng)箱、微型樣品混合器、移液槍等，試劑需要準(zhǔn)備乙醇膽堿酯酶、顯色劑、緩沖劑等。1）配制緩沖液、專用酶、底物、顯色劑，并置于合適的條件下保存。2）采集蔬菜樣品且隨后進(jìn)行混合。采用電子天平稱取樣品4 g，置于玻璃儀器中，加入20 mL緩沖液震蕩后倒出提取液，放置5 min左右，采用移液槍移取酶于玻璃儀器后置于電熱恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)放置30 min。3）使用分光光度計(jì)進(jìn)行吸光度測(cè)定。蔬菜農(nóng)藥殘留的范圍要控制在-10%～110%，超過(guò)此范圍則表明操作失誤，需要重新檢測(cè)。
　　5 注意事項(xiàng)
　　5.1 選擇安全的蔬菜
　　采用酶抑制法進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，需要注意蔬菜的安全狀況，采用安全的蔬菜進(jìn)行檢測(cè)。其中，抑郁率≥70%，則說(shuō)明蔬菜不安全；當(dāng)抑制率為50%～70%時(shí)，說(shuō)明蔬菜存在一定的安全隱患；當(dāng)抑制率為40%～50%時(shí)，說(shuō)明蔬菜較為安全；當(dāng)抑制率≤40%時(shí)，說(shuō)明蔬菜安全[7]。對(duì)于抑制率≥50%以上的蔬菜，需要進(jìn)一步采用色譜法定性定量進(jìn)行檢測(cè)與分析，確定農(nóng)藥殘留的真實(shí)超標(biāo)情況。
　　5.2 選擇合適的酶源
　　酶抑制法檢測(cè)技術(shù)中，常用的酶有植物酶、家畜肝臟酶、人體血漿酶、蠅頭部腦酯酶等，不同酶的敏感性各不相同，對(duì)于蔬菜農(nóng)藥檢測(cè)來(lái)說(shuō)，采用蠅頭部乙酰膽堿的效果最好，將分離純化后的醇液作為乙酰膽堿酯酶源進(jìn)行檢測(cè)，可靠性和準(zhǔn)確性較高。
　　5.3 選擇合適的抑制劑
　　蔬菜農(nóng)藥殘留檢測(cè)中，酶活性和農(nóng)藥的濃度互相關(guān)聯(lián)，酶活性會(huì)對(duì)農(nóng)藥殘留檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和靈敏度造成一定的影響，部分有機(jī)磷農(nóng)藥抑制乙酰膽堿酯酶的效果較為微弱，大部分乙酰膽堿酯酶抑制劑濃度為6～

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