[摘要] 目的 優(yōu)選平喘巴布劑藥材的提取工藝。 方法 采用L9（34）正交試驗法，對藥材乙醇提取時間、乙醇用量、乙醇濃度和提取次數(shù)等影響因素，以芥子堿硫氰酸鹽提取率為考察指標，優(yōu)選平喘巴布劑藥材提取工藝。 結果 最佳提取工藝為用6倍量70%的乙醇回流提取2次，每次2 h。 結論 優(yōu)選的提取工藝合理，為該復方的透皮吸收特性的研究奠定良好的基礎。
　　[關鍵詞] 平喘巴布劑；提取工藝；芥子堿硫氰酸鹽；正交試驗
　　[中圖分類號] TQ461 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2013）10（b）-0108-04
　　平喘巴布劑源于《張氏醫(yī)通》，是由芥子、延胡索、甘遂、細辛等幾味藥材組成，具有利氣祛痰散寒逐飲之效，多用于穴位敷貼防治哮喘，屬于經皮給藥系統(tǒng)，療效確切，且在臨床上具有廣泛的應用基礎[1-2]。在經皮給藥制劑中，確保足夠量的藥物透過皮膚進入體內達到有效的血藥濃度是關鍵，方中芥子、延胡索、甘遂、細辛的主要活性成分均適合于乙醇提取[3-6]，而芥子又為方中君藥，主要含季銨鹽生物堿芥子堿類成分，廣泛存在于十字花科植物中，代表性分是芥子堿，多以硫氰酸鹽形式存在，芥子堿硫氰酸鹽（Sinapine thiocyanate，ST）具有鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘、抗氧化、抗衰老、抗雄激素、降血壓等多種生物活性[3-7]。因此本研究采用正交試驗法，以芥子堿硫氰酸鹽的提取率為指標，優(yōu)選藥材乙醇提取工藝，確定最佳提取條件，為平喘巴布劑體內外透皮吸收特性的研究奠定物質基礎。
　　1 儀器與試藥
　　1.1 藥品與試劑
　　芥子堿硫氰酸鹽對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：111702-201002）；芥子、延胡索、甘遂、細辛等（廣州致信中藥飲片有限公司）；磷酸二氫鉀、乙醇為分析純；甲醇、乙腈為色譜純；水為怡寶水。
　　1.2 儀器
　　LC-20AT高效液相色譜儀（日本島津公司）；高速中藥粉碎機（浙江瑞安市永歷制藥機械有限公司）；旋轉蒸發(fā)儀（上海青浦滬西儀器廠）；KQ-500型超聲清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）；AUW120D精密分析天平（日本島津公司）。
　　2 方法與結果
　　2.1 含量測定方法的建立
　　2.1.1 色譜條件
　　色譜柱：迪馬Platisil ODS柱（5 μm，250 mm×4.6 mm），以Phenomenex為保護柱；流動相：乙腈-0.1 mol/L的磷酸二氫鉀=14∶86；檢測波長：326 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：室溫；進樣量：10 μL。理論塔板數(shù)按芥子堿硫氰酸鹽峰計算不低于3000。
　　2.1.2 溶液的配制
　　2.1.2.1 對照品溶液的配制 精密稱取經五氧化二磷干燥至恒重的芥子堿硫氰酸鹽對照品5.67 mg，于100 mL的容量瓶中，用流動相溶解制成56.7 μg/mL的對照品溶液。
　　2.1.2.2 對照藥材溶液的制備 精密稱取芥子對照藥材細粉1.12 g，置具塞的錐形瓶中，加甲醇50 mL，超聲（功率250 W，頻率20 KHz）提取3次，每次20 min，濾過，濾液減壓回收溶劑至干，殘渣用流動相溶解并轉移至50 mL的容量瓶中，定容，再用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。
　　2.1.2.3 供試品溶液的制備 按照處方比例稱取芥子、延胡索、細辛和甘遂，9份，分別按L9（34）正交試驗表進行實驗，每次提取后趁熱過濾，藥液用旋轉蒸發(fā)儀濃縮至藥材量1∶1的濃縮液，放至室溫后，加水定量至20 mL。然后精密吸取1～9號提取液各0.2 mL，置10 mL的容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，再用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得1～9號正交試驗的供試品溶液。
　　2.1.2.4 陰性樣品溶液的制備 按處方比例稱取除芥子外的其他藥材，與供試品溶液同法制備。
　　2.1.3 方法學考察
　　2.1.3.1 線性范圍考察 分別精密吸取上述芥子堿硫氰酸鹽對照品溶液2、6、10、15、20 μL進樣，測定，以芥子堿硫氰酸鹽峰面積積分值為縱坐標，以進樣量為橫坐標，繪制標準曲線，線性回歸分析，得標準曲線方程：Y = 3×106X - 29 592，r = 0.9999。結果表明芥子堿硫氰酸鹽進樣量在0.1134～1.1340 μg 范圍內與其峰面積積分值呈良好的線性關系。
　　2.1.3.2 精密度試驗 精密吸取芥子堿硫氰酸鹽對照品溶液10 μL，連續(xù)進樣6次，測定，按芥子堿硫氰酸鹽的峰面積積分值計算RSD為0.58%，表明該儀器具有良好的精密度。
　　2.1.3.3 穩(wěn)定性試驗 精密吸取正交試驗5號供試品溶液10 μL，分別于0、2、4、8、12 h進樣，測定芥子堿硫氰酸鹽峰面積，計算其RSD為1.08%，表明樣品溶液在12 h內穩(wěn)定。
　　2.1.3.4 重復性試驗 取正交試驗5號濃縮液，加水定容至20 mL，再精密吸取0.2 mL，5份，按“2.1.2”項下供試品溶液制備方法，制備樣品，分別進樣10 μL，測定，計算芥子堿硫氰酸鹽含量平均值為0.536%，RSD為1.06%。結果表明方法重復性良好。
　　2.1.3.5 加樣回收率試驗 精密吸取正交試驗3號提取液0.2 mL，6份，分別加入芥子堿硫氰酸鹽對照品溶液0.1、0.2和0.4 mL，置10 mL的容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，再用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液為加樣回收供試液，分別進樣測定，計算回收率分別為99.35%（RSD = 2.73%），101.66%（RSD =2.13%），99.76%（RSD = 1.86%）。結果表明，該分析方法的回收率符合要求。
　　2.1.4 樣品分析

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