[摘要] 目的 建立不同產(chǎn)地桑葉UPLC指紋圖譜。 方法 采用ACQUITY UPLC BEH C18（2.1 mm×50.0 mm，1.7 μm）色譜柱，流動相為甲醇-0.2%磷酸水溶液，梯度洗脫，檢測波長為358 nm，流速為0.6 ml/min，柱溫40℃，進(jìn)樣體積1 μl。 結(jié)果 建立了桑葉專屬性的UPLC指紋圖譜，確定了15個共有峰，不同產(chǎn)地桑葉樣品具有較好的相似度。結(jié)論 UPLC指紋圖譜方法重復(fù)性好，簡便可靠，可用于桑葉的快速鑒別，可以為桑葉的質(zhì)量控制和市場應(yīng)用提供依據(jù)。
　　[關(guān)鍵詞] 桑葉；指紋圖譜；超高效液相色譜法
　　[中圖分類號] R286[文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A[文章編號] 1674-4721（2014）05（b）-0008-04
　　
　　Study on UPLC fingerprint of Morus alba L. from different regions
　　PENG Li-ying PENG You-ling YANG Xian-guo▲
　　Hunan Traditional Chinese Medical College,Zhuzhou412012,China
　　[Abstract] Objective To establish UPLC fingerprint of Morus alba L. from different regions. Methods Column ACQUITY UPLC BEH C18(2.1 mm×50.0 mm,1.7 μm)was used.The mobile phase was methanol-0.2％ phosphoric acid water with gradient elution.The detection wave-lengths was 358 nm and column temperature was 40℃ with the flow rate of 0.6 ml/min.The sample injection was 1 μl. Results A specificity fingerprint chromatogram was produced and 15 characteristic peaks were designated.The results showed that the collected samples had a good similarity. Conclusion UPLC fingerprint is a reliable,available and quick method of quality control of Morus alba L. and it is necessary for the safe and practicable use of the medicine.
　　[Key words] Morus alba L.;Fingerprint;UPLC
　　桑葉為�？浦参锷＃∕orus alba L.）的葉，初露后采收，除去雜質(zhì)，曬干，具有疏散風(fēng)熱、清肺潤燥、清肝明目的功效，主要用于風(fēng)熱感冒、肺熱燥咳、頭暈頭痛、目赤昏花[1]。桑葉藥食兩用，現(xiàn)代研究表明桑葉具有降血糖[2-4]、降血壓[5]、降血脂、抗炎、抗衰老[6]、抗腫瘤[7]等功效，在藥用和食品保健方面都發(fā)揮了重要作用。目前，桑葉的質(zhì)量控制主要集中于蘆丁和綠原酸含量的測定[8-12]，除蘆丁外，其他黃酮類化合物也是桑葉質(zhì)量控制的熱點[13-16]。隨著國內(nèi)外市場對桑葉的需求愈來愈大，桑葉的質(zhì)量也參差不齊。課題組認(rèn)為中藥是多成分、多環(huán)節(jié)、多靶點的藥物，質(zhì)量控制也需要體現(xiàn)中藥特色，僅靠單一或幾個指標(biāo)難以衡量質(zhì)量的優(yōu)劣。中藥指紋圖譜是一種綜合的、可量化的鑒定手段，是建立在中藥化學(xué)成分系統(tǒng)研究的基礎(chǔ)上，主要用于評價中藥材及中藥制劑半成品質(zhì)量的真實性、優(yōu)良性和穩(wěn)定性，符合中醫(yī)中藥整體性和模糊性的特點[17]。課題組為了進(jìn)一步控制桑葉質(zhì)量，采用UPLC方法，對從全國收集的桑葉藥材進(jìn)行指紋圖譜進(jìn)行研究。
　　1 儀器與試劑
　　1.1 儀器
　　KQ-100B型超聲波清洗器（昆山超聲儀器有限公司）；JA51002型電子分析天平（島津）；Waters Acquity UPLC H-Class超高效液相色譜系統(tǒng)，Empower工作站，含四元梯度泵、自動進(jìn)樣器、紫外檢測器（Waters公司）。
　　1.2 試劑
　　甲醇（色譜純，TEDIA公司），乙腈（色譜純，TEDIA公司），水為娃哈哈純凈水，磷酸（色譜純，北京化工廠）。
　　1.3 對照品及藥材
　　對照品異槲皮苷和紫云英苷，購于成都植標(biāo)化純生物技術(shù)有限公司，供含量測定用，批號分別為PCS0371-lot 120510和PCS0468-lot 120328；對照品蘆丁購于中國食品藥品檢定研究院，批號為0080-9705。不同產(chǎn)地的桑葉藥材11批，均由湖南中醫(yī)藥大學(xué)生藥學(xué)教研室潘清平教授鑒定為桑科植物桑（Morus alba L.）的葉，藥材批號及來源見表1。
　　
　　表1 桑葉藥材批號及來源
　　
　　
　　
　　
　　
　　
　　2 方法與結(jié)果
　　2.1 色譜條件
　　色譜柱為ACQUITY UPLC BEH C18（2.1 mm×50.0 mm，1.7 μm）；流速：0.6 ml/min；檢測波長：358 nm；柱溫：40℃；進(jìn)樣體積：1 μl；流動相：甲醇（A）-0.2%磷酸水（B）梯度洗脫，洗脫程序：0→22 min，10%A→32%A。
　　2.2 供試品溶液的制備
　　藥材粉碎，過60目篩，取藥粉約0.5 g，精密稱定，置于100 ml三角瓶中，加入75%甲醇50 ml，超聲處理（功率250 W，頻率33 kHz）30 min，放冷，用75%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。
　　2.3 對照品溶液的制備
　　精密稱取對照品異槲皮苷、蘆丁和紫云英苷適量，用75%甲醇溶解，定容，得到其濃度分別為0.092、0.042、0.054 μg/μl。
　　2.4 方法學(xué)考察
　　2.4.1 精密度試驗取同一批桑葉供試品（20080305），按照2.2項的方法制備供試品溶液1份，按照上述色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定指紋圖譜。以10號峰（圖1）的保留時間和峰面積為參照，計算樣品中所含15個共有峰的相對保留時間和相對峰面積。各共有峰的相對保留時間的RSD＜0.5％，相對峰面積的RSD＜1.0％，表明儀器的精密度良好。
　　
　　
　　
　　
　　
　　
　　
　　
　　圖1 桑葉藥材共有模式指紋圖譜
　　
　　2.4.2 重復(fù)性試驗按上述方法平行制備同一批桑葉供試品（20080305），測定指紋圖譜�？疾鞓悠分兴�含有15個共有峰的相對保留時間和相對峰面積，各色譜峰的相對保留時間的RSD＜0.5%，相對峰面積的RSD＜1.0％，提示方法的重復(fù)性良好。
　　2.4.3 穩(wěn)定性試驗同一批桑葉供試品（20080305）溶液，分別于0、2、4、6、8、12、24 h進(jìn)樣測定，以各峰的相對保留時間和相對峰面積進(jìn)行考察，桑葉樣品24 h各色譜峰的相對保留時間的RSD＜0.5％，相對峰面積的RSD＜1.0％，表明桑葉樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

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