摘要：目的建立高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器法(HPLC-ELSD)同時(shí)測(cè)定筋骨草藥材中乙酰哈巴苷和哈巴苷含量的方法,并對(duì)不同產(chǎn)地和批次的筋骨草藥材進(jìn)行測(cè)定。方法采用Dikma C18色譜柱(4.6 mm×150 mm, 5 μm)；流動(dòng)相A為水,B為乙腈,梯度洗脫(0～6 min,5%B；6～11 min,5%～15%B；11～17 min,15%B)；洗脫流速1 mL/min；柱溫30 ℃。蒸發(fā)光散射檢測(cè)器漂移管溫度103 ℃,以壓縮空氣為霧化氣,氣體流速1.6 L/min。結(jié)果乙酰哈巴苷在0.017～17.32 μg、哈巴苷在0.003～1.62 μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系,精密度和準(zhǔn)確性良好。福建6個(gè)批號(hào)樣品的乙酰哈巴苷和哈巴苷含量較高。結(jié)論乙酰哈巴苷和哈巴苷可作為監(jiān)測(cè)筋骨草藥材質(zhì)量的指標(biāo)性成分。
　　關(guān)鍵詞：筋骨草；乙酰哈巴苷；哈巴苷；高效液相色譜法；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器；含量測(cè)定
　　DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2014.07.026
　　中圖分類號(hào)：R284.1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1005-5304(2014)07-0089-04
　　Simultaneous Determination of 8-O-acetylharpagide and Harpagide in Ajuga decumbens Thunb. by HPLC-ELSDWEN Bin-yu1,2, LI Jian-rong2 (1.Kouns Pharmaceutical Co. Ltd, Postdoctoral Workstation of Zhongguancun Haidian Science Park, Beijing 100085, China；2.Institute of Chinese Materia Medica, China Academy of Chinese Medical Sciences, Beijing 100700, China)
　　Abstract：Objective To build an HPLC-ELSD method for simultaneous determination of 8-O-acetylharpagide and harpagide in Ajuga decumbens Thunb.；To determine Ajuga decumbens Thunb. samples from different area and of different batches. Methods Chromatographic separation was achieved on a Dikma C18 column (4.6 mm×150 mm, 5 μm). The mobile phase consisted of water (A) and acetonitrile (B), using a gradient elution of 5% B at 0-6 min, 5%-15% B at 6-11 min, 15% B at 11-17 min, and the flow rate was 1.0 mL/min. An evaporative light scattering-detector (ELSD) was used with the temperature of drift tube at 103 ℃ and the gas flow rate of air was at 1.6 L/min. Results Good linearity was shown at the concentration range of 0.017-17.32 μg for 8-O-acetylharpagide, and 0.003-1.62 μg for harpagide. The validated method was of great precision and accuracy. The contents of 8-O-acetylharpagide and harpagide in Ajuga decumbens Thunb. from Fujian province were higher than the contents in other localities. Conclusion The content of harpagide can be used as index component to monitor quality control of Ajuga decumbens Thunb..
　　Key words：Ajuga decumbens Thunb.；8-O-acetylharpagide；harpagide；HPLC；ELSD；content determination
　　
　　筋骨草Ajuga decumbens Thunb.又名金瘡小草或白毛夏枯草,藥用始載于《本草拾遺》,其味苦性寒,入肺、肝經(jīng),目前收錄于2010年版《中華人民共和國(guó)
　　
　　基金項(xiàng)目：中國(guó)博士后科學(xué)基金面上項(xiàng)目(2013M540913)
　　通訊作者：李建榮,Tel：010-64056575,E-mail：jrongliem@ sina.com
　　藥典》(一部),具有清熱解毒、涼血消腫功效,用于治療咽喉腫痛、肺熱咳血、跌打腫傷[1]。在筋骨草的有效成分中,乙酰哈巴苷和哈巴苷的抗腫瘤活性最強(qiáng)[2],且在所含的環(huán)烯醚萜類成分中,乙酰哈巴苷的含量最高,哈巴苷次之。藥典采用高效液相色譜-紫外檢測(cè)法(HPLC-UV)測(cè)定乙酰哈巴苷含量對(duì)筋骨草藥材進(jìn)行質(zhì)量控制[1]。也有報(bào)道采用HPLC-UV同時(shí)測(cè)定筋骨草藥材中乙酰哈巴苷和哈巴苷含量[3]。乙酰哈巴苷的最大吸收波長(zhǎng)為197 nm,哈巴苷為202 nm,同屬于紫外末端吸收,在此波長(zhǎng)范圍內(nèi)波長(zhǎng)的微小變化會(huì)嚴(yán)重影響檢測(cè)結(jié)果；同時(shí)流動(dòng)相在該波長(zhǎng)范圍進(jìn)行梯度洗脫時(shí)會(huì)產(chǎn)生基線漂移,導(dǎo)致峰面積積分準(zhǔn)確性較差。本試驗(yàn)建立高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器法(HPLC-ELSD)同時(shí)測(cè)定筋骨草藥材中乙酰哈巴苷和哈巴苷含量的方法,進(jìn)一步優(yōu)化筋骨草藥材的質(zhì)量控制。
　　1儀器與試藥
　　安捷倫1200高效液相色譜儀(含柱溫箱、自動(dòng)進(jìn)樣器、四元梯度泵),Alltech ELSD2000ES蒸發(fā)光散射檢測(cè)器,超聲波清洗器(KQ-250DB,昆山市超聲儀器有限公司)。
　　乙酰哈巴苷對(duì)照品(純度＞99.9%,批號(hào)111925- 201001)、哈巴苷對(duì)照品(純度＞99.9%,批號(hào)111729- 200603)購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。筋骨草藥材購(gòu)于福建、湖北、河南等地,康辰醫(yī)藥股份有限公司提供,經(jīng)康辰醫(yī)藥股份有限公司質(zhì)量部孟令增鑒定為唇形科植物筋骨草Ajuga decumbens Thunb.的干燥全草。甲醇和乙腈均為色譜純,購(gòu)自美國(guó)Fisher公司。水為純凈水,購(gòu)自杭州娃哈哈股份有限公司。
　　2方法
　　2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)
　　Dikma C18色譜柱(4.6 mm×150 mm,5 μm)；流動(dòng)相A為水、B為乙腈,梯度洗脫(0～6 min,5%B；6～11 min, 5%～15%B；11～17 min,15%B)；流速1 mL/min；柱溫30 ℃。蒸發(fā)光散射檢測(cè)器漂移管溫度103 ℃,以經(jīng)過(guò)濾干燥后的壓縮空氣為霧化氣,氣體流速1.6 L/min。在上述條件下,哈巴苷保留時(shí)間為5.8 min,乙酰哈巴苷保留時(shí)間為13.6 min,色譜圖見(jiàn)圖1。

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