UPLC法測定馬甲子藥材中馬甲子素和messagenic,acid,B
發(fā)布時間:2019-08-29 來源: 歷史回眸 點擊:
摘 要:建立UPLC同時測定馬甲子藥材中馬甲子素和messagenic acid B 2種抗腫瘤活性成分的方法。采用Waters ACQUITY UPLC BEH-C18(2.1 mm×50 mm,1.7 μm)色譜柱,乙腈-0.1%甲酸溶液流動相梯度洗脫;流量:0.45 mL/min;柱溫30 ℃;檢測波長320 nm。結(jié)果表明:馬甲子素和messagenic acid B分別在0.198 6~3.972 μg,0.151 4~3.028 μg范圍進(jìn)樣量與峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系,平均加標(biāo)回收率分別為99.20%(RSD=1.34%)和99.69%(RSD=0.56%)。該方法能在3.5 min內(nèi)使馬甲子素和messagenic acid B最大程度地分離,相比較HPLC而言,更加快捷、高效。
關(guān)鍵詞: 馬甲子;messagenic acid B;超高效液相色譜;抗腫瘤活性
文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A 文章編號:1674-5124(2017)04-0048-04
0 引 言
馬甲子(Paliurus ramosissimus(Lour.)Poir)為鼠李科馬甲子屬植物,主要含有三萜類、總黃酮和環(huán)肽生物堿等成分,具有治療瘡癰潰瘍,解毒消腫的功效[1]。本課題組經(jīng)前期實驗研究,從馬甲子葉中分離出一種新型的五環(huán)三萜類化合物,結(jié)構(gòu)鑒定并命名為馬甲子素。體外細(xì)胞實驗顯示,相比于馬甲子葉中抗腫瘤活性成分白樺脂酸[2-3],馬甲子素的抗腫瘤活性更強[4]。單獨的馬甲子素含量的HPLC測定方法已見報道[5-6]。通過對馬甲子化學(xué)成分的進(jìn)一步研究,從馬甲子葉中首次分離出一種化合物單體,經(jīng)鑒定為已知化合物messagenic acid B[7-8],與馬甲子素僅存在單雙取代基的差異,均屬于以白樺脂酸為母核的五環(huán)三萜類衍生物,體外細(xì)胞實驗也表現(xiàn)出較好的抗腫瘤活性[9]。本文通過建立超高效液相色譜(UPLC)含量測定方法[10],在10 min內(nèi)完成一次馬甲子樣品分析。此方法分離度好,重復(fù)性高,能同時測定馬甲子藥材中兩種活性成分,可較為全面地控制有效成分的含量,為馬甲子藥材的質(zhì)量控制和合理種植、采收提供科學(xué)依據(jù)。
1 實驗部分
1.1 儀器和試藥
Waters ACQUITY超高效液相色譜,包括四元高壓梯度泵、自動進(jìn)樣恒溫樣品管理器、柱溫箱、二極管陣列檢測器、Empower 3色譜工作站。
乙腈(色譜純,美國Sigma);超純水;甲酸、甲醇均為分析純(成都艾科達(dá)化學(xué)試劑有限公司)。
馬甲子素對照品和messagenic acid B對照品(成都普思生物科技股份有限公司,經(jīng)峰面積歸一法計算,純度均大于98%);馬甲子鮮葉采于四川省成都市新津牧馬山,經(jīng)四川省中醫(yī)藥科學(xué)院鑒定為鼠李科馬甲子屬多年生木本植物馬甲子Paliurus ramosissmus(Lour.)Poir。
1.2 方法與結(jié)果
1.2.1 樣品的配置
分別精密稱取馬甲子素和messagenic acid B對照品1.986 mg、1.514 mg,用甲醇超聲溶解并定容至10 mL,即得各自對照品溶液。精密吸取各自對照品溶液2.5 mL至10 mL容量瓶,用甲醇定容至刻度,混合均勻,作混合對照品溶液。
精密稱取經(jīng)冷凍干燥后的馬甲子葉粉末5.0 g(過4號篩),置具塞三角瓶中,精密加入95%乙醇50 mL,稱定質(zhì)量,80 ℃加熱回流提取3 h,取出冷卻后,補足減失質(zhì)量,搖勻過濾,取續(xù)濾液作為供試品溶液。
1.2.2 色譜條件
色譜柱:Waters ACQUITY UPLC BEH-C18(2.1 mm×50 mm,1.7 μm);流動相A:乙腈;流動相B:0.1%甲酸溶液;梯度洗脫程序如表1所示,流量:0.45 mL/min;柱溫:30 ℃;檢測波長:320 nm;進(jìn)樣量:4 μL;混合對照品和馬甲子供試品的色譜圖分別見圖1(a)和圖1(b)。
1.2.3 線性關(guān)系
分別精密吸取馬甲子素和messagenic acid B對照品溶液,按1,2,4,8,15,20 μL的進(jìn)樣量,以1.2.2色譜條件進(jìn)行檢測。以峰面積為縱坐標(biāo),進(jìn)樣量為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(見圖2),分別計算線性回歸方程:y(馬甲子素)=8×106x+36 725(r2=0.999 8);y(messagenic acid B)=9×106x+51 485(r2=0.999 9)。表明馬甲子素對照品和messagenic acid B對照品分別在0.198 6~3.972 μg,0.151 4~3.028 μg范圍內(nèi)與峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。
1.2.4 精密度試驗
精密吸取混合對照品溶液4 μL,連續(xù)進(jìn)樣5次,測定馬甲子素和messagenic acid B峰面積的RSD分別為1.48%和1.35%,表明儀器精密度較好,具體數(shù)據(jù)如表2所示。
1.2.5 重復(fù)性試驗
精密稱取同一批次的馬甲子葉粉末5份(過4號篩),按1.2.1方法制得供試品溶液,進(jìn)樣4 μL,測定馬甲子素和messagenic acid B的含量,其RSD分別為1.93%和0.93%,表明本方法具有較好的重復(fù)性,具體數(shù)據(jù)如表3所示。
1.2.6 穩(wěn)定性試驗
精密稱取等量同一批次的馬甲子葉粉末(過4號篩),按1.2.1方法制得供試品溶液,分別在2,4,8,
10,12,24 h進(jìn)樣4 μL,測定馬甲子素和messagenic acid B的含量,其RSD分別為0.87%和1.20%(如表4所示)。結(jié)果表明,供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。
1.2.7 加標(biāo)回收率試驗
相關(guān)熱詞搜索:馬甲 藥材 法測定 UPLC messagenic
熱點文章閱讀