12種藏醫(yī)常用藥材抗結(jié)核分枝桿菌活性篩選
發(fā)布時(shí)間:2019-08-28 來源: 美文摘抄 點(diǎn)擊:
摘要:目的 觀察12種藏醫(yī)常用藥材對(duì)結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株H37Rv的體外抗菌活性。方法 取適量的12種藏醫(yī)常用藥材制備其水及/或乙醇粗提物,比例法檢測(cè)各粗提物對(duì)結(jié)核分枝桿菌H37Rv菌株的抗菌MIC。結(jié)果 試驗(yàn)藥材中紅花的水及乙醇粗提物MIC分別為5.86 mg/ml和0.74mg/ml,對(duì)H37Rv抗菌活性最強(qiáng)。唐古特青蘭、藏墊雪靈芝和短穗兔耳草的水提取物具有較明顯的抗菌活性,MIC分別為18.75mg/ml、18.75mg/ml和46.88mg/ml。其他各藥材抗菌活性較弱,其MIC均大于50mg/ml。結(jié)論 所試12種藏醫(yī)常用藥材中紅花、唐古特青蘭、雪靈芝和短穗兔耳草均具有不同程度的體外抗結(jié)核分枝桿菌活性。
關(guān)鍵詞:結(jié)核分枝桿菌;藏藥;藥物敏感性試驗(yàn)
結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌引起的傳染病,由于耐藥及耐多藥結(jié)核分枝桿菌(multidrug resistant tuberculosis,MDR-TB)的出現(xiàn), 結(jié)核病合并HIV感染以及人群流動(dòng)性增加等原因, 結(jié)核病在全球的流行再次呈現(xiàn)上升態(tài)勢(shì)[1]。自上世紀(jì)四十年代第一個(gè)抗結(jié)核分枝桿菌藥物-鏈霉素及其后的異煙肼、利福平等藥物應(yīng)用于臨床以來, 雖然人們已研發(fā)出近20種抗結(jié)核分枝桿菌的藥物, 但均存在副作用大, 易產(chǎn)生耐藥性等缺點(diǎn)[2],而且新藥物的研發(fā)遠(yuǎn)不及細(xì)菌耐藥性形成的速度。因此,從豐富的傳統(tǒng)中藥資源中尋找有效的抗結(jié)核藥物,受到人們?cè)絹碓蕉嗟闹匾暋?br> 為了尋找具有明顯抗結(jié)核分枝桿菌的天然藥物用于臨床結(jié)核病的治療,本研究對(duì)12種藏醫(yī)常用藥材進(jìn)行了體外抗結(jié)核分枝桿菌H37RV菌株的藥物敏感性試驗(yàn),現(xiàn)將初步篩選結(jié)果報(bào)告如下:
1資料與方法
1.1 一般資料 結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株H37Rv(ATCC27294),國(guó)家疾病預(yù)防控制中心惠贈(zèng),西藏大學(xué)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室真空冷凍保存。
1.2試驗(yàn)藥材 試驗(yàn)用藏藥材樣品產(chǎn)地、來源、鑒定人、藥用部位及提取溶媒見表1。
1.3培養(yǎng)基 改良羅氏培養(yǎng)基。制備方法參考"結(jié)核病診斷細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)規(guī)程"進(jìn)行[3]。
1.4實(shí)驗(yàn)方法
1.4.1試驗(yàn)樣品的制備 稱取各藥材粗粉適量,1:10加入1000ml純水或乙醇,室溫下浸泡24h,60~70℃回流提取3次,2h/次,濾除藥渣,合并濾液,濾液60~70℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至適當(dāng)體積或浸膏,部分藥物浸膏以真空冷凍干燥至粉末。不同樣品提取用溶劑見表1。取各藥物提取物適量,以滅菌0.5%吐溫-80生理鹽水溶解即為試驗(yàn)藥物原液,-80℃存放備用。部分提取物加入適量吐溫-80助溶。試驗(yàn)藥物原液使用時(shí)以滅菌0.5%吐溫-80生理鹽水2倍稀釋成若干稀釋度使用。
1.4.2藏藥培養(yǎng)基的制備 基礎(chǔ)培養(yǎng)基仍采用改良羅氏培養(yǎng)基, 改良羅氏培養(yǎng)基中的水分以試驗(yàn)藥物原液及稀釋液代替, 孔雀綠溶液的配制、全卵液的勻化、培養(yǎng)基的凝固及保存等同改良羅氏培養(yǎng)基的制備。
1.4.3菌懸液制備 刮取改良羅氏培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)2w之結(jié)核分枝桿菌H37RV培養(yǎng)物(需刮取斜面各個(gè)部分的培養(yǎng)物)置于磨菌器底部,使用磨菌棒研磨使呈乳酪狀,以滅菌0.5%吐溫-80生理鹽水稀釋,與1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)麥?zhǔn)媳葷峁鼙葷幔磁涑?mg/ml的菌懸液。
1.4.4接種與培養(yǎng) 將1mg/ml的菌懸液10倍稀釋至10-2mg/ml。以滅菌吸管準(zhǔn)確吸取菌液0.1ml分別接種于含藥培養(yǎng)基及對(duì)照培養(yǎng)基斜面上,每管接種菌量為10-3mg。置37℃培養(yǎng),4w后觀察結(jié)果。待空白對(duì)照管菌落生長(zhǎng)至培養(yǎng)基斜面1/3以上時(shí)終止培養(yǎng),對(duì)照培養(yǎng)基菌落在200以下者不納入研究范圍。
1.4.5計(jì)算耐藥百分比 (含藥培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)菌落數(shù)/對(duì)照培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)菌落數(shù))×100%, 若耐藥百分比小于1%, 則認(rèn)為受試菌對(duì)該濃度藥物敏感,反之則為不敏感。
2結(jié)果
12種試驗(yàn)藥物水和/或乙醇粗提物對(duì)結(jié)核分枝桿菌的最低抑制濃度( minimal inhibitory concentration, MIC )結(jié)果見表1。結(jié)果表明,12種試驗(yàn)藥材中紅花的水和乙醇粗提物MIC分別為5.86mg/ml和0.74mg/ml,對(duì)H37Rv的抗菌活性最強(qiáng),且80%乙醇粗提物活性優(yōu)于水提取物。其次,具有較明顯抗菌活性的依次為唐古特青蘭、藏墊雪靈芝和短穗兔耳草的水提取物,其MIC分別為18.75mg/ml、18.75mg/ml和46.88mg/ml。其他各藥活性較弱,其MIC均大于50 mg/ml,其中螃蟹甲和烏雙龍膽在試驗(yàn)藥物的第一個(gè)稀釋度即無抗菌活性。
3討論
我國(guó)傳統(tǒng)中醫(yī)藥對(duì)結(jié)核病的治療已有2000余年的歷史。藏醫(yī)藥是我國(guó)民族醫(yī)藥的一枝奇葩,不僅對(duì)疾病具有獨(dú)特的認(rèn)識(shí)和用藥習(xí)慣,而且由于西藏地處青藏高原,常年高寒缺氧、紫外線輻射強(qiáng),日照充足、空氣干燥,這些獨(dú)特的生境可能促使藏醫(yī)藥用植物產(chǎn)生具有更高藥理活性的成分,甚至獨(dú)有的藥理活性成分。
本實(shí)驗(yàn)嘗試從藏醫(yī)臨床常用藥材中初步篩選體外具有抗結(jié)核分枝桿菌活性的藏醫(yī)用藥物。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在所選試驗(yàn)藥物中大部分具有不同程度的體外抗菌活性,其中尤以紅花作用最為明顯,此與宋玉宗等[4]的報(bào)道相一致,但其作用稍弱,其可能原因?yàn)槲覀儗?shí)驗(yàn)所采用的方法為絕對(duì)濃度法,而其為液體稀釋法,前者不及后者對(duì)藥物濃度的測(cè)試精準(zhǔn)。
唐古特青蘭、藏墊雪靈芝、短穗兔耳草均為藏醫(yī)常用藥材,有研究顯示三者均具有一定的體外抗菌活性。短穗兔耳草主要用于發(fā)熱、腎炎、肺病、引道流黃黑色液物等疾病[5],張忠以及楊云裳[6]研究顯示其粗提物對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌及熒光假單胞菌都有抑菌活性,MIC最低可達(dá)0.05g/ml;雪靈芝是一種重要的民間草藥, 常用于治療感冒、肺炎、黃疸、風(fēng)濕癥、淋巴結(jié)核、腎結(jié)石、子宮病等[7],鮑敏等[8]采用濾紙片擴(kuò)散法測(cè)試雪靈芝的水及乙醇提取物對(duì)枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、梭狀桿菌等均有不同程度的抑制作用。另外,也有研究提示唐古特青蘭亦具有一定的抗菌活性[9]。但有關(guān)這三種常用藥材抗結(jié)核分枝桿菌的情況則未見報(bào)道。在本實(shí)驗(yàn)中三者的水提取物均表現(xiàn)有較好的抗菌活性。雖然紫金標(biāo)、草木犀[10,11]等其余藥材也有文獻(xiàn)顯示具有抗菌活性,但在本實(shí)驗(yàn)中顯示的抗菌活性均較低。
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