RP—HPLC測(cè)定不同產(chǎn)地白蘞藥材中沒食子酸的含量
發(fā)布時(shí)間:2019-08-29 來源: 美文摘抄 點(diǎn)擊:
摘要 [目的]建立白蘞藥材中沒食子酸的RP-HPLC含量測(cè)定方法,為白蘞藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究提供依據(jù)。[方法]采用Dikma Diamonsil C18(250×4.6 mm,5 μm)色譜柱,以乙腈- 0.2%磷酸(3∶97)為流動(dòng)相進(jìn)行等度洗脫。流速為1.0 ml/min,柱溫為30 ℃,檢測(cè)波長為270 nm。[結(jié)果]沒食子酸檢測(cè)濃度在3.15~202 μg/ml的范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系(R2=0.999 9);平均回收率為102.8%,RSD為1.15%。[結(jié)論]該方法快速,重現(xiàn)性好,準(zhǔn)確度高,操作簡(jiǎn)便,可用于白蘞藥材的質(zhì)量控制。
關(guān)鍵詞 白蘞;沒食子酸;反相高效液相色譜法;質(zhì)量控制
中圖分類號(hào) S567 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611(2015)04-108-03
白蘞(Ampelopsis japonica( Thunb·)Makino),葡萄科植物,又名野葡萄秧、鵝抱蛋、白草等。據(jù)《中藥大辭典》記載,白蘞以塊根入藥,具有清熱解毒、生肌止疼、消腫的功效,既可內(nèi)服,又可外敷,主要用于醫(yī)治癰腫瘡瘍、燙傷、扭挫傷等[1-2]。臨床廣泛應(yīng)用于治療化膿性皮膚感染、細(xì)菌性痢疾等疾病,療效顯著[3-4]。現(xiàn)代研究表明白蘞中主要含有沒食子酸、大黃素、大黃素甲醚、大黃酚、蘆薈大黃素、羽扇豆醇等化合物,沒食子酸為白蘞中抗菌、抗病毒的主要藥效成分,且其含量較高[5-6]。目前在藥典中,白蘞藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)只有定性分析而無定量分析。為更好地控制白蘞生藥材質(zhì)量,更好地利用白蘞生藥資源和適應(yīng)中藥現(xiàn)代化的發(fā)展要求,該研究基于2015年版《中國藥典》科研課題,采用定量研究白蘞中沒食子酸含量的高低來評(píng)價(jià)白斂生藥材質(zhì)量,以期為制定白蘞藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究提供科學(xué)依據(jù)。
1 材料與方法
1.1 材料
1.1.1 研究對(duì)象。白蘞干燥藥材由第二軍醫(yī)大學(xué)附屬長征醫(yī)院藥材科提供,經(jīng)第二軍醫(yī)大學(xué)長征醫(yī)院陳萬生教授鑒定為白蘞A.japonica。
1.1.2 主要儀器。Agilent 1260 HPLC系統(tǒng)(Agilent Technologies,美國),包括G1311A四元泵、G1322A真空脫氣機(jī)、G1329A自動(dòng)進(jìn)樣器、G1316A柱溫箱和G4212B DAD檢測(cè)器,使用Chem Station軟件數(shù)據(jù)處理系統(tǒng);BAS124S-CW萬分之一電子分析天平(Sartorius,德國);BP110S十萬分之一電子分析天平(Sartorius,德國);XW-01定時(shí)可調(diào)速漩渦混合器(上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠);KUDOS SK7200H 超聲波清洗器(上?茖(dǎo)超聲儀器有限公司);TDL-4A 低速離心機(jī)(上海菲恰爾分析儀器有限公司);AG 22331 Humberg超高速離心機(jī)(Eppendorf,德國);Eppendorf Research plus 可調(diào)量程移液器(Eppendorf,德國)。
1.1.3 主要試劑。沒食子酸對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所提供,供含量測(cè)定用,批號(hào)110831-201204);甲醇和乙腈均為色譜純?cè)噭‵isher Scientific,美國);甲酸和磷酸均為色譜級(jí)試劑;水為超純水。
1.2 方法
1.2.1 對(duì)照品溶液的制備。精密稱取沒食子酸對(duì)照品適量,加50%甲醇溶液制成每1 ml含202 μg的溶液,即得。
1.2.2 供試品溶液的制備。取本品粉末(過四號(hào)篩)5 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入50%甲醇50 ml,密塞,稱定重量,超聲處理60 min后,放冷,再稱定重量,用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得。
1.2.3 色譜分析條件。色譜柱Dikma Diamonsil C18(250×4.6 mm,5 μm),柱號(hào)99903;乙腈-0.2%磷酸(3∶97)為流動(dòng)相;流速1.0 ml/min,柱溫30 ℃,檢測(cè)器為DAD,波長為270 nm。
1.2.4 方法學(xué)考察。
1.2.4.1 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)。分別吸取對(duì)照品溶液及供試品溶液各10 μl,在“1.2.3”色譜條件下,注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定,記錄色譜圖,考察系統(tǒng)適應(yīng)性。
1.2.4.2 線性關(guān)系的考察。將沒食子酸對(duì)照品貯備液用50%甲醇稀釋制成每1 ml含202、 101、50.5、25.25、12.625、6.312 5、3.156 25 μg的系列溶液,分別吸取10 μl注入液相色譜儀,記錄色譜圖,以進(jìn)樣濃度X(μg/ml)為橫坐標(biāo)、峰面積Y為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算線性回歸方程。
1.2.4.3 檢測(cè)限和定量限的考察。將沒食子酸對(duì)照品逐步稀釋后進(jìn)樣測(cè)定,以色譜圖中信噪比(S/N)為3時(shí)的進(jìn)樣量為最低檢測(cè)限(LOD),信噪比(S/N)為10時(shí)的進(jìn)樣量為最低定量限(LOQ)。
1.2.4.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)。取同一供試樣品溶液,按“1.2.3”項(xiàng)色譜分析條件分別于0、4、8、12、24 h進(jìn)樣,進(jìn)樣量10 μl,測(cè)定峰面積積分值,計(jì)算RSD。
1.2.4.5 精密度試驗(yàn)。取按“1.2.1”方法制備的對(duì)照品溶液重復(fù)進(jìn)樣6次,計(jì)算峰面積的RSD值。
1.2.4.6 重復(fù)性試驗(yàn)。取同一批號(hào)的樣品按“1.2.2”方法制備供試品溶液6份(樣品批號(hào)為白蘞02),按“1.2.3”項(xiàng)下色譜分析條件,進(jìn)樣量為10 μl,測(cè)定峰面積,計(jì)算平均含量和RSD。
1.2.4.7 加樣回收試驗(yàn)。取同一批號(hào)已知含量的樣品6份(樣品批號(hào)為白蘞02),精密加入分別與樣品中沒食子酸含量相等的對(duì)照品,按“1.2.2”方法制備供試品溶液,再按“1.2.3”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定,進(jìn)樣量為10 μl,測(cè)定峰面積,計(jì)算平均回收率和RSD。
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