【摘要】 目的:探索從老翹中提取總黃酮的最佳工藝。方法:以總黃酮含量為指標(biāo),應(yīng)用正交實(shí)驗(yàn),優(yōu)化老翹總黃酮的提取工藝。結(jié)果:總黃酮最佳工藝為:20倍量70%乙醇在80℃下回流提取2小時(shí)。結(jié)論:該工藝簡(jiǎn)單可行,是提取老翹總黃酮的有效途徑。
　　【關(guān)鍵詞】 老翹;總黃酮;提取工藝
　　【中圖分類(lèi)號(hào)】 R282.5【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】 B【文章編號(hào)】 1007-8517(2009)24-0056-01
　　Study on extraction technology of total flavonoids from grown Forsythia Suspensa
　　Ma Xue-mei, Ma Wen-bing
　　(College of Chemical Engineering and Enviroment, North University of China, Shanxi Taiyuan 030051)
　　Abstract: ObjectiveTo study and optimize the extraction technology of the total flavonoids from grown Forsythia Suspensa. Methods The orthogonal design was used to optimize the extraction technology with the content of the total flavonoids as an index. Results The optimum extracting technology was as follow: with twenty times 70% ethanol, extracted for two hours at 80℃. Conclusion This method can be applied to the extraction of the total flavonoids from grown Forsythia Suspensa because it is simple and feasible.
　　Key words: grown Forsythia Suspensa; Total flavonoids; Extraction technology
　　
　　連翹為木犀科(Oleaceae)連翹屬(Forsythia)植物連翹(Forsythia suspense(Thunb.)Vahl)的干燥果實(shí)。連翹藥材商品分為“青翹”和“老翹”,果實(shí)初熟尚帶綠色時(shí)采收稱(chēng)為青翹,果實(shí)熟透顏色發(fā)黃時(shí)采收稱(chēng)為老翹[1]。現(xiàn)代藥理表明其有抗菌、強(qiáng)心、利尿、鎮(zhèn)吐等作用,是許多中藥制劑的主要原料,藥用價(jià)值明顯。因此,眾多學(xué)者對(duì)其進(jìn)行了化學(xué)成分和活性研究,表明其提取物有一定的抗氧化活性[2-3]。黃酮類(lèi)化合物是一類(lèi)天然抗氧化劑,具有清除人體中超氧離子自由基、抗衰老和增強(qiáng)機(jī)體免疫力的生理活性[4-5]。因此,測(cè)定老翹中黃酮總含量并優(yōu)化其提取工藝有重要意義,為連翹資源的綜合利用提供理論依據(jù)和技術(shù)參考。
　　1 儀器與試藥
　　1.1 儀器 TU-1901型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限公司);XMTF-1000-2型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海預(yù)康科技有限公司);JJ200精密電子天平(常熟雙杰測(cè)試儀器廠);DFT-100手提式高速中藥粉碎機(jī)(溫嶺大德中藥機(jī)械有限公司)。
　　1.2 試藥 老翹2009年3月購(gòu)自山西省太原市仁和大藥房;蘆丁(中國(guó)藥品生物制品檢定所);乙醇、氫氧化鈉、亞硝酸鈉和硝酸鋁均為分析純。
　　2 方法與結(jié)果
　　2.1 總黃酮的測(cè)定[6]
　　2.1.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取120 ℃干燥恒重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品10 mg,置50 ml容量瓶中,用60%乙醇溶解并定容得到濃度為0.2 mg/ml對(duì)照品溶液,備用。
　　2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密量取對(duì)照品溶液各0.0, 0.5, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0 ml分別置于25 ml容量瓶中,再依次加入1 ml 5 %亞硝酸鈉溶液,搖勻,放置6 min后加入1 ml 10%硝酸鋁溶液,搖勻,放置6 min后加入4%氫氧化鈉溶液1 ml,再加30%乙醇定容,搖勻,放置15 min后在510 nm處測(cè)定吸光值。以吸光度值為y軸,蘆丁濃度(mg/ml)為x軸,制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。得到回歸方程為Y = 14.4288X + 0.0068,r = 0.9993, 線性范圍3.91-43.60 μg/ml。
　　2.1.3 樣品溶液的制備 準(zhǔn)確稱(chēng)取陰干粉碎的老翹10 g,于500 ml三頸圓底燒中,以一定濃度的乙醇作為提取溶劑,控制提取液溫度,利用索氏提取器減壓回流提取。提取液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮成膏狀后于60 ℃真空干燥箱中干燥至恒重,準(zhǔn)確稱(chēng)取干燥粉末20 mg用60%乙醇溶解并定容于10 ml容量瓶中。依照2.1.2項(xiàng)下方法測(cè)定吸光度,代入回歸方程中計(jì)算總黃酮的含量,并計(jì)算總黃酮的收率:總黃酮的收率(%)=(提取液中總黃酮濃度×提取液體積)/對(duì)應(yīng)的原料重量×100%
　　2.2 單因素實(shí)驗(yàn)
　　2.2.1 提取溶劑濃度對(duì)總黃酮收率的影響
　　
　　圖1乙醇濃度對(duì)總黃酮收率的影響
　　
　　由圖1可看出,隨著乙醇濃度的增加黃酮收率呈上升趨勢(shì)。用70%-90%乙醇提取得率較高,80%的得率最高。當(dāng)乙醇濃度高于80%時(shí),提取液顏色加深并且總黃酮得率開(kāi)始下降。這可能是由于提取溶劑極性減少使提取液中脂溶性物質(zhì)增加,使總黃酮含量相對(duì)下降。同時(shí)用70%和90%乙醇提取的總黃酮得率接近,因此80%乙醇提取效果最好。
　　2.2.2 提取時(shí)間對(duì)總黃酮收率的影響
　　
　　圖2 提取時(shí)間對(duì)總黃酮收率的影響
　　
　　由圖2可看出,隨著提取時(shí)間的增加,總黃酮收率也隨之增加。當(dāng)提取時(shí)間達(dá)到2 h以后,總黃酮收率增加趨勢(shì)不明顯,且提取液顏色顯著加深,可能是由于提取時(shí)間的增加使雜質(zhì)溶出量也增加。從總黃酮得率來(lái)看,提取時(shí)間為2 h,2.5 h和3 h得率較高且較為接近。因此,選擇2 h為最佳提取時(shí)間。
　　2.2.3 提取溫度對(duì)總黃酮收率的影響
　　
　　圖3 提取溫度對(duì)總黃酮收率的影響
　　
　　由圖3可看出,總黃酮收率隨溫度升高而增大。提取溫度在60℃和70℃時(shí)的總黃酮收率較低。當(dāng)溫度高于70℃,總黃酮收率隨溫度增大而明顯升高。提取溫度在80-100℃之間總黃酮收率變化不大,考慮到乙醇沸點(diǎn)低于80℃且高溫會(huì)破壞黃酮類(lèi)化合物的穩(wěn)定性。因此選中最佳提取溫度為80℃,提取過(guò)程中保持該溫度不變。
　　2.2.4 料液比對(duì)總黃酮收率的影響
　　
　　圖4 料液比對(duì)總黃酮收率的影響
　　
　　由圖4可看出開(kāi)始隨著料液比的增大總黃酮收率增加,當(dāng)料液比為1:25時(shí)達(dá)到最大,繼續(xù)增大料液比總黃酮收率下降。料液比的增加會(huì)造成后續(xù)操作(如濃縮純化)的難度和成本增加。綜合考慮認(rèn)為1:20為最佳料液比。
　　正交實(shí)驗(yàn)考察采用L9(3??3)正交表考察最佳工藝條件。正交實(shí)驗(yàn)因素水平安排見(jiàn)表1,實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。
　　
　　表1
　　正交實(shí)驗(yàn)因素水平表
　　水平A提取時(shí)間 t/hB乙醇濃度 (%)C料液比 (g : ml)11.560%1 : 152270%1 : 2032.580%1 : 25
　　
　　表2
　　L9(3??3)正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　實(shí)驗(yàn)號(hào)ABC黃酮收率 (%)11112.0521222.2731332.3642122.1552232.3962312.5173131.9483222.5893312.26K16.686.146.82K27.057.247.00K36.787.136.69k12.222.042.27k22.352.412.33k32.262.382.23R0.371.100.31
　　
　　由表2分析可知,影響老翹總黃酮收率的因素主次順序?yàn)锽﹥A﹥C,即乙醇濃度﹥提取時(shí)間﹥料液比。老翹總黃酮提取的最佳工藝為A2B2C2,即70%乙醇濃度,料液比1 : 20,回流提取2小時(shí)。在該工藝條件下,總黃酮得率可達(dá)到2.61%。
　　參考文獻(xiàn)
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