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        HPLC法同時測定川芎藥材中阿魏酸、咖啡酸的含量

        發(fā)布時間:2019-08-28 來源: 散文精選 點擊:


          [摘要] 目的 建立HPLC法同時測定川芎藥材中阿魏酸和咖啡酸含量的方法。 方法 采用Kromasil -ODS(250mm×4.6mm,5?m)色譜柱,流動相為甲醇-0.5%醋酸水(35:65);流速:1.0mL/min;檢測波長:323nm。 結(jié)果 阿魏酸和咖啡酸的線性范圍分別為:13.62~257.4mg/mL (r=0.9996)和29.40~515.7mg/mL (r=0.9995);平均回收率(n=6)分別為阿魏酸96.6%(RSD=0.8%)和咖啡酸95.6%(RSD=0.5%)。 結(jié)論 該法操作簡單,結(jié)果準(zhǔn)確,重現(xiàn)性好,為全面評價不同產(chǎn)地川芎藥材的質(zhì)量提供方法。
          [關(guān)鍵詞] HPLC;阿魏酸;咖啡酸;川芎
          [中圖分類號] R917 [文獻標(biāo)識碼] B [文章編號] 2095-0616(2014)21-102-03
          川芎(Rhizoma Chuanxiong)為傘形科植物川芎(Ligusticum chuanxiong Hort.)的干燥根莖,其所含主要有效成分有酚酸類、內(nèi)酯類、生物堿和揮發(fā)油等[1],廣泛應(yīng)用于臨床治療。目前,對川芎中成分的含量測定多集中在阿魏酸、藁本內(nèi)酯和川芎嗪等的測定[2-4]。本研究將川芎藥材中阿魏酸和咖啡酸兩組分含量同時測定,并對不同產(chǎn)地的藥材進行含量比較,以完善川芎的質(zhì)量控制。
          1 試劑與方法
          1.1 儀器
          Agilent-1100型高效液相色譜儀,配有二極管陣列檢測器(DAD)、四元梯度泵、在線真空脫氣機和柱溫箱。超聲波清洗器(DS3120 DC),RE-52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)。
          1.2 試劑
          甲醇為色譜級,水為重蒸水,其余試劑均為分析純。
          1.3 試驗用藥
          阿魏酸、咖啡酸對照品(自制,經(jīng)HPLC檢測質(zhì)量分?jǐn)?shù)均>99.0%)。川芎購自四川等10產(chǎn)地,經(jīng)鑒定均為正品。
          1.4 方法
          1.4.1 溶液制備
          1.4.1.1 對照品儲備液的制備 分別取阿魏酸和咖啡酸對照品適量,用甲醇溶解,制成濃度分別為0.5008mg/mL和1.000mg/mL的對照品溶液。
          1.4.1.2 供試品溶液的制備 選取不同產(chǎn)地的川芎藥材,粉碎過篩后,分別精密稱定粉末約1.0g,置錐形瓶中,然后加入0.5mol/L NaOH溶液50mL,超聲提取20min,共提取3次,冷卻,靜置,離心,取上清液,用稀HCl調(diào)pH=2,然后用乙酸乙酯等量萃取3次,合并萃取液,使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干,用甲醇復(fù)溶并稀釋至25mL量瓶中,0.45μm微孔濾膜過濾,取續(xù)濾液,即得供試品溶液。
          1.4.2 色譜條件 色譜柱:Kromasil -ODS(250mm× 4.6mm,5μm);流動相:甲醇-0.5%醋酸水(35:65);檢測波長:320nm;流速:1.0mL/min;進樣量:10μL;柱溫:30℃。
          2 結(jié)果
          2.1 系統(tǒng)適用性試驗
          按照上述樣品處理方法和色譜條件進行測定,兩峰之間的分離度大于1.5;理論塔板數(shù)大于30 000;拖尾因子在0.95~1.05之間,均滿足定量要求。色譜圖見圖1。
         。˙)
          1.咖啡酸;2.阿魏酸
          2.2 線性關(guān)系的考察
          分別精密量取阿魏酸和咖啡酸對照品溶液適量,配成混合對照品系列溶液,按照上述色譜條件,進樣分析,以各自的濃度X(μg/mL)為橫坐標(biāo),峰面積(Y)為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到阿魏酸和咖啡酸回歸方程分別為:Y=5.339×104X+230.8,r=0.9996;Y=4.588×104X+470.2,r=0.9995。線性范圍分別為:13.62~57.40μg/mL和29.40~515.7μg/mL。
          2.3 精密度試驗
          取阿魏酸和咖啡酸的中濃度混合對照品溶液,按照1.4.2色譜條件,連續(xù)進樣6次。分別測得阿魏酸和咖啡酸的峰面積,計算兩組分峰面積的RSD分別為0.3%和0.5%,精密度良好。
          2.4 重復(fù)性試驗
          取6份同一產(chǎn)地川芎藥材粉末,精密稱定,按照1.4.1項下處理,按1.4.2色譜條件,進樣分析。阿魏酸和咖啡酸含量的RSD分別為0.2%和0.2%。
          2.5 穩(wěn)定性試驗
          取同一供試品溶液,室溫放置,分別于0,2,4,6,8,12h,按照2.1項下處理,按2.2色譜條件,進樣分析。阿魏酸和咖啡酸峰面積的RSD分別為0.7%和0.3%。結(jié)果表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。
          2.6 加樣回收率試驗
          取同一產(chǎn)地已知含量的川芎藥材粉末6份,加入已知濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液適量,再加入0.5mol/L NaOH溶液至50mL,按照按2.2色譜條件進樣分析并計算其加樣回收率。阿魏酸和咖啡酸的平均回收率分別為96.6%和95.6%,RSD分別為0.9%和0.5%。見表1。
          2.7 樣品測定
          取不同產(chǎn)地的川芎藥材粉末精密稱定1.00g,按照2.1項下處理,按2.2色譜條件,進行分析,分別計算阿魏酸和咖啡酸的含量,結(jié)果見表2。
          3 討論
          3.1 提取條件的優(yōu)化
          本實驗通過考察不同酚酸類成分的提取方法[5-8],比較了甲醇、甲醇-水、甲醇-5%甲酸水、0.5mol/L NaOH溶液這4種不同的提取溶劑,氯仿、乙酸乙酯等2種不同的萃取溶液,對樣品進行提取分析后進樣分析,通過考察阿魏酸和咖啡酸的含量,從而選擇了最佳的提取條件。
          3.2 色譜條件的優(yōu)化
          本實驗考察了3根不同的色譜柱,分別為Waters-C18(150mm×3.9mm,4μm);Venusil XBP C18(L)(250mm×4.6 mm,5μm)和Kromasil -ODS (250mm×4.6mm,5μm),綜合考慮選擇Kromasil色譜柱。參考藥典[9]選擇檢測波長為320nm,此波長可避免雜質(zhì)干擾且可較好的檢測該兩組分。

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