采用茚三酮比色法測(cè)定茶葉中游離氨基酸總量。確定采用沸水萃取，以0.2mg/ml的谷氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液在吸取系列工作液后不加水，加入0.5ml的PH8.0的磷酸鹽緩沖液和0.5ml2%茚三酮溶液，采用數(shù)顯電熱恒溫水浴鍋沸水浴15min加熱，冷卻后蒸餾水定容至25ml，在570nm處測(cè)定吸光度。所得線性方程A=4.312X-0.017，相關(guān)系數(shù)r=0.99955，回收率達(dá)到92.2%左右，精確度為0.8%，試驗(yàn)操作簡(jiǎn)單，重復(fù)性和穩(wěn)定性良好。
　　茶葉 游離氨基酸 茚三酮比色法茶葉中游離氨基酸含量是用來(lái)描述茶葉鮮爽程度的一個(gè)重要品質(zhì)指標(biāo)，還是人體所必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，同事對(duì)人體疾病的康復(fù)和預(yù)防起著極重要的保健作用。測(cè)定茶葉中游離氨基酸含量對(duì)茶葉的開(kāi)發(fā)利用具有一定的指導(dǎo)意義。以谷氨酸為標(biāo)準(zhǔn)品，采用分光光度計(jì)為測(cè)定儀器，探索一種適合于茶葉游離氨基酸含量的分析方法。本試驗(yàn)對(duì)該方法的主要影響因素，精密度和回收率等進(jìn)行研究，確定了茶葉中游離氨基酸總量的測(cè)定方法。
　　1材料與方法1.1儀器和用具數(shù)顯電熱恒溫水浴鍋，型號(hào)電子分析天平：感量為0.0001g，型號(hào)紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)�？烧{(diào)式電爐。1.2試劑和溶液所用試劑應(yīng)為分析純（AR），水為蒸餾水。PH8.0磷酸鹽緩沖液：1/15mol/L磷酸氫二鈉溶液95ml和1/15mol/L磷酸二氫鉀溶液5ml，混勻。2%茚三酮溶液：稱取水合茚三酮（純度不低于99%）2g，加50ml水和80mg氯化亞錫攪拌均勻。分次加少量水溶解，放在暗處，靜置一晝夜，過(guò)濾后加水定容至100ml。1.3試驗(yàn)方法1.3.1標(biāo)準(zhǔn)貯備液及標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制準(zhǔn)確稱取100mg谷氨酸（純度不低于99%）溶于100ml水，定容作為母液。（1ml含谷氨酸1mg）。配制成0.1mg/ml，0.2mg/ml，0.3mg/ml，0.4mg/ml，0.5mg/ml濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。采用GB/T8314-2002中茶游離氨基酸的測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定。1.3.2樣品處理稱取3g（精確到0.0001g）粉碎混合均勻過(guò)60目篩樣品于500ml的錐形瓶中，加450ml煮沸的蒸餾水，沸水浴浸提45min，每10min震搖一次，減壓過(guò)濾至500ml容量瓶中，殘?jiān)�用熱蒸餾水洗滌2-3次，冷卻，定容。
　　2結(jié)果與討論2.1反應(yīng)條件加水與不加水的比較本試驗(yàn)選擇反應(yīng)條件加水和不加水兩種標(biāo)準(zhǔn)系列的比較：分別吸取兩組0，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0mL濃度0.1mg/ml谷氨酸工作液于一組25mL容量瓶中，一組加水4ml，另一組水4ml再分別加入0.5ml的PH8.0的磷酸鹽緩沖液+0.5ml2%茚三酮溶液，沸水浴15min加熱，冷卻蒸餾水定容至25ml，在570nm處測(cè)定吸光度。試驗(yàn)結(jié)果顯示加水的標(biāo)準(zhǔn)系列顯色效果不理想，標(biāo)準(zhǔn)曲線線性很差。而不加水的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性好，相關(guān)系數(shù)R2=0.9991。
　　2.2標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度的選擇本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)配制的不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.1mg/ml，0.2mg/ml，0.3mg/ml，0.4mg/ml）測(cè)定加標(biāo)回收率進(jìn)行比較。本實(shí)驗(yàn)分別選取4份茶粉一份作為本底，另3份加入不同量的氨基酸標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行樣品處理。取1ml的茶湯測(cè)定其游離氨基酸總量作為本底量，另3份分別內(nèi)含1mg、2mg、3mg的茶氨酸的加標(biāo)量。按GB/T8314-2002方法測(cè)定，試驗(yàn)結(jié)果表明0.1mg/ml和0.2mg/ml濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液的回收率比較高，但是考慮到有的樣品吸光度高超出標(biāo)準(zhǔn)曲線，所以選取0.2mg/ml濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液最合適。而0.3mg/ml、0.4mg/ml濃度繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)逐漸降低，高濃度的比色效果不好，導(dǎo)致回收率低。
　　2.3加熱方式的選擇本試驗(yàn)選擇兩種加熱方式：數(shù)顯電熱恒溫水浴鍋、可調(diào)節(jié)式電爐。本實(shí)驗(yàn)選取4份茶粉一份作為本底，另3份加入不同量的氨基酸標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行樣品處理。取1ml的茶湯測(cè)定其游離氨基酸總量作為本底量，另3份分別內(nèi)含1mg、2mg、3mg的茶氨酸的加標(biāo)量。按GB/T8314-2002方法測(cè)定分別在數(shù)顯
　　電熱恒溫水浴鍋和可調(diào)式電爐加熱的沸水浴中加熱15min來(lái)比較回收率。結(jié)果見(jiàn)表2，可以看出數(shù)顯電熱恒溫水浴鍋加熱的平均回收率最高達(dá)到92.8%。而可調(diào)式電爐加熱法回收率為81.9%。且在試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)可調(diào)式電爐沸水浴加熱放置不便易造成受熱不均的情況影響，導(dǎo)致還原茚三酮與氨及另一分子茚三酮的縮合反應(yīng)不完全。2.4測(cè)定方法的精確度分別以同一加標(biāo)的樣品重復(fù)比色測(cè)定5次，計(jì)算游離氨基酸總量，結(jié)果見(jiàn)表3。RSD為0.80%，平均回收率為92.2%，表明本方法的準(zhǔn)確度和精密度良好。
　　3結(jié)論采用茚三酮比色法測(cè)定茶葉中的游離氨基酸總量，采用沸水萃取，以0.2mg/ml的谷氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液在吸取系列工作液后不加水，加入0.5ml的PH8.0的磷酸鹽緩沖液和0.5ml2%茚三酮溶液，采用數(shù)顯電熱恒溫水浴鍋沸水浴15min加熱，冷卻后蒸餾水定容至25ml，在570nm處測(cè)定吸光度。方法的變異系數(shù)小于0.80%，加標(biāo)平均回收率為92.2%，本方法操作簡(jiǎn)單，穩(wěn)定性和重現(xiàn)性較好。
　　參考文獻(xiàn)：
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