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        HPLC法測(cè)定湖南省不同產(chǎn)地絞股藍(lán)藥材中人參皂苷Rb1的含量

        發(fā)布時(shí)間:2019-08-28 來源: 短文摘抄 點(diǎn)擊:


          【摘要】 目的 采用HPLC法對(duì)湖南省4個(gè)產(chǎn)地絞股藍(lán)中人參皂苷Rb1含量進(jìn)行測(cè)定。方法 采用甲醇回流提取,高效液相色譜法。色譜柱C18(Column 200×4.6mm,5μ),乙腈-0.5%磷酸(20:80)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為203nm。結(jié)果 人參皂苷Rb1在0.515-5.665μg范圍呈良好的線性關(guān)系,r=0.9996;人參皂苷Rb1平均回收率:97.56%,RSD為1.05%。結(jié)論 該方法可靠、便捷,可以作為控制絞股藍(lán)藥材質(zhì)量的方法。同時(shí),不同產(chǎn)地絞藍(lán)中總皂苷的含量存在差異,以湖南綏寧產(chǎn)絞股藍(lán)中總皂苷含量(0.53%)最高。
          【關(guān)鍵詞】 絞股藍(lán);人參皂苷Rb1;高效液相色譜法
          文章編號(hào):1004-7484(2013)-02-0557-02
          絞股藍(lán)[1-3](Gynostemma pentaphyllum)為葫蘆科多年生草質(zhì)藤本植物,有“南方人參”和“第二人參”的美譽(yù),別名小苦藥、公羅鍋底、五葉藤、遍地生根、甘茶蔓等。20世紀(jì)70年代末至80年代初期,日本著名的絞股藍(lán)研究專家永井正博等[4]先后在絞股藍(lán)中發(fā)現(xiàn)了人參皂苷,并分離得到了80多種皂苷類物質(zhì),確定其為四環(huán)三萜達(dá)瑪烷型結(jié)構(gòu),其中4種皂苷與4種人參皂苷同物異名。已證明絞股藍(lán)具有減肥、降血脂、調(diào)血壓、延緩衰老、預(yù)防冠心病、抑制癌細(xì)胞、調(diào)節(jié)人體生理機(jī)能、增強(qiáng)機(jī)體免疫力等功能。2002年衛(wèi)生部將絞股藍(lán)列為新資源藥食同源保健品。絞股藍(lán)的黃酮、多糖、微量元素等都具有很好的保健功效,但其主要藥效成分是絞股藍(lán)皂苷。本文采用高效液相色譜法對(duì)絞股藍(lán)中人參皂苷Rb1的含量進(jìn)行了測(cè)定,以期為絞股藍(lán)的應(yīng)用提供一些依據(jù)。
          1 儀器、試劑與藥材
          LC-10A高效液相色譜儀(日本島津);島津SPD-10A檢測(cè)器;N2000色譜工作站;HX-06型超聲波清洗器(武漢恒信世紀(jì)科技有限公司);AE-240型電子天平(梅特勒-托利多(上海)有限公司)。人參皂苷Rb1購于中國藥品生物制品檢定研究院,批號(hào):704-200114。甲醇、乙腈(色譜純?cè)噭旖蚩泼軞W化學(xué)試劑有限公司),水為重蒸餾水,其它試劑均為分析純(均為湖南匯虹試劑有限公司提供)。藥材采自湖南綏寧、桑植、瀏陽、平江,經(jīng)湖南省中醫(yī)藥研究院中藥研究所生藥研究室鑒定為為葫蘆科多年生草質(zhì)藤本植物。
          2 方法與結(jié)果
          2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;乙腈-0.5%磷酸(20:80)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為203nm;理論板數(shù)按人參皂苷Rb1峰計(jì)算不得低于5000。
          2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取人參皂苷Rb15.15mg,置10ml量瓶中,加甲醇使溶解并稀釋至刻度,搖勻,即得。
          2.3 供試品溶液的制備 取產(chǎn)自湖南綏寧絞股藍(lán)藥材粉末(過三號(hào)篩)約0.5g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇25ml,稱定重量,加熱回流1小時(shí),放冷,再稱定重量,用甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得。
          2.4 線性關(guān)系考察 精密吸取人參皂苷Rb1(C=0.515mg/ml)對(duì)照品溶液1、3、5、7、9、11μl進(jìn)樣,測(cè)定其峰面積積分值,以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo),峰面積積分值為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,其回歸方程為:Y=45300x-652.28,r=0.9996。結(jié)果表明人參皂苷Rb1在0.515-5.665μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。
          2.5 精密度試驗(yàn) 取絞股藍(lán)藥材按供試品溶液的制備方法制成供試品溶液。精密吸取10μl,連續(xù)進(jìn)樣6次,測(cè)定其峰面積,計(jì)算RSD為1.2%。
          2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取2.5項(xiàng)下的供試品溶液,精密吸取10μl,于0、4、8、12、24小時(shí)進(jìn)樣,測(cè)定其峰面積。計(jì)算,RSD為1.6%,說明24h內(nèi)供試液穩(wěn)定性良好。
          2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批藥材制成供試品溶液6份,測(cè)定含量。結(jié)果RSD1.6%,說明方法重復(fù)性好。
          2.8 回收率試驗(yàn) 精密稱取6份已知含量的本品0.3g,每份加入人參皂苷Rb1約1mg,按供試品測(cè)定項(xiàng)下測(cè)定。人參皂苷Rb1平均回收率為97.56%,RSD為1.05%。結(jié)果見表1。
          2.9 樣品含量測(cè)定 取采自湖南綏寧、桑植、瀏陽、平江的絞股藍(lán)藥材,按供試品溶液的制備方法制備成供試液,分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl,注入高效液相色譜儀,測(cè)定,計(jì)算,即得,結(jié)果見表2、圖1、圖2。
          3 討論
          3.1 絞股藍(lán)具有減肥、降血脂、調(diào)血壓、延緩衰老、預(yù)防冠心病、抑制癌細(xì)胞、調(diào)節(jié)人體生理機(jī)能、增強(qiáng)機(jī)體免疫力等功能,其中絞股藍(lán)皂苷是其主要藥效成分。目前對(duì)絞股藍(lán)的研究多數(shù)集中在絞股藍(lán)總皂苷上,其中人參皂苷Rb1是皂苷的主要成分之一,文獻(xiàn)報(bào)道,主要采用紫外分光光度法測(cè)定絞股藍(lán)總皂苷。我們選擇了人參皂苷Rb1作為絞股藍(lán)藥材含量控制指標(biāo),采用高效液相色譜法,經(jīng)方法學(xué)考察和湖南省4個(gè)不同產(chǎn)地絞股藍(lán)的測(cè)定,表明該方法可靠、便捷,可以作為控制絞股藍(lán)藥材的質(zhì)量方法。
          3.2 絞股藍(lán)皂苷的含量與品種、產(chǎn)地氣候、土壤條件、采收時(shí)間、采樣部位等有很大關(guān)系,對(duì)湖南省4個(gè)不同產(chǎn)地的絞股藍(lán)全草進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果表明不同地區(qū)絞股藍(lán)的人參皂苷Rb1含量有較大差異,其中以湖南綏寧縣產(chǎn)質(zhì)量好。
          參考文獻(xiàn)
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          [2] 孫萬森,吳喜利,喬成林,等.絞股藍(lán)總皂苷防治多臟器損傷的藥理研究進(jìn)展 [J].中藥材,2007,30(2):241.
          [3] 李金青,楊洪軍.絞股藍(lán)的藥理作用研究進(jìn)展[J].中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用,2009,3(7):189.
          [4] 黃敏珠,王棟,尹忠臣,等.紫外分光光度法測(cè)定絞股藍(lán)中絞股藍(lán)總苷的含量[J].中國中藥雜志,2010,35(18):2410.

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